o capping na extremidade 5' é uma modificação essencial do mRNA. Os mRNAs com estruturas de cap, especialmente as estruturas Cap1, facilitam que os mRNAs evitem respostas imunológicas inatas in vivo, resultando em uma tradução eficiente de proteínas.
O capping enzimático (o método em duas etapas) é o método convencional de capping de mRNA, semelhante ao processo de capping em organismos eucarióticos. Sob a ação de uma série de enzimas, a guanina-7-metil (m7G) é ligada à extremidade 5' do mRNA por meio de um vínculo trifosfato 5'-5' e sofre modificações de metilação para formar a estrutura de cap Cap 1 (m7GpppN).
Diagrama da formação da estrutura de cap natural
O fluxo de reação de capping enzimático é o seguinte:
O DNA de plasmídeo linearizado é usado como template para a transcrição in vitro (IVT) na presença da polimerase T7, e o mRNA com uma estrutura de cap no extremo 5' é formado após uma purificação em um único passo usando a enzima de capping da vacínio e a 2'-O-metiltransferase.
Detalhes dos Serviços
Serviço Opcional |
Detalhes do Serviço |
Prazo de Entrega (Dias) |
tampão Enzimático de mRNA |
Reação de capping enzimático |
1 |
Otimização da reação de capping - opcional |
Design e otimização dos componentes da reação |
3~7 |
Nossos Recursos
- Design e otimização dos componentes da reação de capping
O componente da reação de capping é otimizado, e a produção do transcripto de mRNA é aumentada significativamente.
- Verificação da expressão in vitro
O mRNA com cap é transfetado em células 293T, e a expressão da proteína alvo pode ser detectada.
- Controle rigoroso de RNase
Por meio do controle rigoroso das RNases no ambiente experimental e nos materiais de consumo, a degradação do mRNA é eficazmente prevenida.
Estudo de Caso
A plataforma de mRNA da Yaohai Bio-Pharma desenvolveu um processo perfeito de reação de capping.
Para o mRNA de eGFP, um pré-produto de mRNA preparado por capping enzimático, um sinal de fluorescência de eGFP (fluorescência verde) em nível alto pode ser observado após a transfeção de células 293T por 24 horas, o qual é detectado por Western Blot (WB), demonstrando que a proteína alvo, proteína de fluorescência verde melhorada (eGFP), pode ser expressa eficientemente in vitro.
Expressão de mRNA de eGFP Cappado Enzimaticamente em Células 293T
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