Com relação à produção em massa de mRNA, a transcrição in vitro (IVT) é um método mais eficiente e maduro. A reação IVT utiliza DNA plasmídico linear contendo o promotor T7 como template, e mRNA é sintetizado com trifosfatos de nucleotídeos (NTPs) como substratos na presença da polimerase RNA T7.
A modificação de nucleotídeos é uma descoberta revolucionária no campo do mRNA, onde moléculas de mRNA não modificado são reconhecidas por sensores de RNA intracelulares, ativando a imunidade inata. Considerando a imunogenicidade in vivo do mRNA e a eficiência de tradução, o processo IVT geralmente emprega certos tipos de NTPs modificados, e nucleotídeos modificados comuns são pseudouridina (Ψ), N1-metil-pseudouridina (N1Ψ) e citosina-5-metil (5mC).
Processo de Transcrição in Vitro de mRNA
Diagrama da reação de transcrição in vitro (IVT)
Detalhes dos Serviços
Serviço Opcional |
Detalhes do Serviço |
Prazo de Entrega (dia útil) |
Transcrição in vitro (IVT) |
IVT, Transcrição in vitro |
1 |
| Modificações de nucleotídeos (Ψ/N1Ψ/5mC, etc.) |
| Remoção do template de DNA (DNAse I) |
Otimização da condição IVT - opcional |
Design e otimização dos componentes da reação IVT |
2-5 |
Nossos Recursos
- Estratégias Diversificadas de Modificação de Nucleotídeos
Melhora a estabilidade do mRNA e a expressão de proteínas in vivo.
- Design Rigoroso de Testes e Otimização
a preparação de fragmentos de mRNA de até 10kb pode ser alcançada.
Ao otimizar as condições da reação IVT, a taxa de transcrição chega a 1:200.
- Controle rigoroso de RNase
O controle rigoroso da RNase por meio de um ambiente experimental e consumíveis pode prevenir eficazmente a degradação do mRNA.
Estudo de Caso
O sistema de reação IVT atual está aproximadamente otimizado para sistemas sintéticos com cerca de 100 nt de comprimento, não para mRNAs de comprimento arbitrário. Quanto mais longa for a sequência de mRNA, mais difícil será transcrevê-la e mais suscetível ela será à degradação.
Para preparar sequências de mRNA personalizadas com um comprimento de aproximadamente 10 kb, a Yaohai Bio-Pharma conseguiu preparar amostras de alta qualidade com uma alta razão de transcrição de 1:135 e obteve 135 μg de produtos de mRNA inicialmente purificados após 1 μg de plasmídeo linearizado ser transcrito in vitro através de um rigoroso design experimental, otimização contínua das condições de reação e controle estrito de RNase.
identificação de mRNA (Eletroforese em Gel de Agarose)
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