Síntese personalizada de saRNA
MRNA autoamplificante (saRNA), também conhecido como RNA replicon, codifica sequências de mRNA de transcrição in vitro (IVT) e genes de replicase viral derivados de alfavírus ou flavivírus. Os genes de replicase viral permitem a autoamplificação do mRNA, o que resulta em maior expressão de proteínas e uma dose mínima de RNA necessária em comparação com mRNAs não amplificantes. Outro aspecto é que o saRNA é uma molécula relativamente grande (mais de 14 kb).
A Yaohai Bio-Pharma desenvolveu um conjunto de tecnologias de síntese de mRNA para fornecer mRNA não amplificante e mRNA autoamplificante (1000 nt~14000 nt), como design e otimização de sequências, IVT, purificação, liofilização e encapsulamento em nanopartículas lipídicas (LNP). Todos os produtos são liberados sob padrões rigorosos de controle de qualidade.
Fig.1 Características Estruturais de mRNAs IVT: Convencional, Circular e Autoamplificante.
Características de Sequência de mRNA Autoamplificante
O RNA autoamplificante compreende quatro proteínas não estruturais (designadas como nsP1, nsP2, nsP3 e nsP4), que são derivadas de alfavírus, vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV). Entre essas, a nsP1 exibe atividades enzimáticas duplas, nomeadamente GTase e N7MTase, enquanto a nsP2 possui atividade RTPase, crucial para a formação da estrutura Cap 0 do mRNA IVT. Além disso, a nsP2 atua como uma protease e helicase, facilitando o processamento intricado de todo o complexo nsP. A função precisa da nsP3 permanece nebulosa, embora ela interaja com várias proteínas da célula hospedeira, contribuindo para a atenuação da resposta antiviral desencadeada pelo hospedeiro.
Uma região de promotor subgenômico (SGP) do alphavirus está localizada antes do gene de interesse (GOI). O elemento SGP facilita o início da transcrição do GOI, bypassando a leitura da sequência que codifica as proteínas nsP virais.
Fig.2 Síntese e ensaios celulares do saRNA de eGFP da Plataforma RNASci da Yaohai Bio-Pharma.
Soluções Personalizadas de saRNA
O protocolo de síntese do saRNA é semelhante ao do mRNA: Síntese de mRNA Personalizada
- Design de Sequência
- Preparação do Plasmídeo Modelo
- transcrição in vitro (IVT)
- tampão Enzimático de mRNA
- tampão Co-transcricional de mRNA
- purificação de mRNA
- liofilização de mRNA
- Encapsulamento em LNP
- Análise e Testes
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
