Ensaios de Potência Baseados em Células
A Importância do Teste de Potência de mRNA
Com o desenvolvimento rápido de vacinas e terapias baseadas em mRNA, é necessário um painel específico de métodos de análise para testar a potência (definindo sua atividade biológica), envolvendo a eficiência de tradução do mRNA. Esses métodos geralmente são baseados em transfecção celular e ensaios funcionais da proteína alvo.
Yaohai Bio-Pharma oferece testes de potência baseados em células para substâncias farmacêuticas de mRNA ou produtos LNP, incluindo transfecção celular (células 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, etc.) e ensaios ELISA ou Western Blotting (WB).
Requisitos Regulatórios para Ensaios de Potência
De acordo com as considerações regulatórias da OMS, 'A potência de cada lote da vacina final deve ser determinada usando um método funcional quantitativo e validado adequado. Potenciais ensaios in vitro de potência podem incluir sistemas de transfecção baseados em células ou ensaios sem células.' E a USP recomendou um 'ensaio baseado em células' para testar a potência do mRNA, ou seja, a expressão da proteína alvo.
Método Analítico
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Análise
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Métodos
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Ensaios de Potência
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Transfecção baseada em células e identificação da proteína alvo:
células 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, etc.
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Procedimento
Passo 1. Transfecção baseada em células com mRNA ou mRNA-LNP
As células são cultivadas e transfetadas com mRNA ou mRNA-LNP. Em detalhes, o mRNA é transfetado após ser misturado com um reagente de transfeção, enquanto o mRNA-LNP é transfetado diretamente nas células. Após 24-48 horas, esclareça o sobrenadante contendo a proteína expressa por centrifugação.
Passo 2. Ensaios Funcionais da Proteína Alvo
Realize ensaios ELISA ou WB para avaliar o ligação funcional das proteínas-alvo.
Estudo de Caso
Ensaios de Potência Baseados em Células de Amostras de mRNA
A Yaohai-BioPharma desenvolveu um método de ensaio de potência baseado em células para mRNA, envolvendo cultivo celular, transfeção celular e ensaios funcionais de proteínas. Transfetamos mRNA de eGFP, mRNA de mCherry, mRNA de luciferase, mRNA de proteína spike em células 293T e detectamos a proteína-alvo por meio de sinais fluorescentes, luminescentes ou coloridos, WB, ELISA.
Ensaios de Potência Baseados em Células de Produtos de mRNA pela Yaohai Bio-Pharma
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