Produkcja rekombinowanego białka: zmodyfikowane szczepy E. coli

Escherichia coli (E. coli) odegrała znaczącą rolę w produkcji białek rekombinowanych w przemyśle biofarmaceutycznym, służąc jako pierwszy wektor ekspresji do produkcji leków biologicznych. E. coli szczyci się szybkim wzrostem, wygodną manipulacją genetyczną i szybką syntezą białek rekombinowanych, wśród innych zalet. Rozległe modyfikacje uczyniły E. coli optymalnym wyborem do ekspresji białek, co doprowadziło do zaprojektowania różnych zmodyfikowanych szczepów E. coli.

Yaohai Bio-Pharma specjalizuje się w świadczeniu kompleksowych usług outsourcingowych w zakresie fermentacji, oczyszczania, opracowywania procesu formulacji i produkcji szeregu biofarmaceutyków przy użyciu systemów ekspresji E. coli. W odniesieniu do bogatego doświadczenia Yaohai podsumowaliśmy, że cztery powszechne szczepy E. coli są wykorzystywane do produkcji białek rekombinowanych i ich cech.

Szczep BL 21

Pochodzący z linii E. coli B szczep BL21 nie posiada proteazy Lon ani proteazy błony zewnętrznej OmpT. Proteaza Lon degraduje przede wszystkim białka egzogenne, podczas gdy OmpT degraduje głównie białka macierzy zewnątrzkomórkowej. Brak tych dwóch kluczowych proteaz może skutecznie zapobiegać degradacji białek rekombinowanych.

Odmiana origami

Szczep Origami, pochodna E. coli K-12, ma mutacje w reduktazie tioredoksyny i reduktazie glutationu, które ułatwiają tworzenie prawidłowo złożonych białek zawierających wiązania disulfidowe i zwiększają rozpuszczalność białek. Szczep Origami, w tym Origami, Origami 2 i Origami B, nadaje się do ekspresji aktywnych białek zawierających wiązania disulfidowe.

Odmiana SHuffle

Szczep SHuffle konstytutywnie wyraża izomerazę wiązań disulfidowych DsbC w cytoplazmie, promując tworzenie prawidłowych wiązań disulfidowych w utlenionych białkach. Działa również jako molekularny chaperon do składania białek, pomagając w tworzeniu prawidłowej konformacji.

Szczep Rosetta

Szczep Rosetta uzupełnia E. coli o tRNA odpowiadające rzadkim kodonom, mając na celu poprawę poziomu ekspresji genów egzogennych, zwłaszcza genów eukariotycznych, w systemach prokariotycznych. Pochodzący z BL21 i niosący plazmid pRARE odporny na chloramfenikol, uzupełnia sześć tRNA odpowiadających rzadkim kodonom (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC i GGA), pierwotnie nieobecnych w E. coli, zapewniając bardziej „uniwersalną” ekspresję białka.

Podsumowanie

Trzy główne czynniki udanej produkcji białek rekombinowanych to gospodarz, wektor i warunki hodowli. Na podstawie zrozumienia właściwości fizykochemicznych białka rekombinowanego, unikalnych zalet każdego szczepu i specyficznych potrzeb eksperymentu należy wybrać najbardziej odpowiedniego gospodarza. Ponadto należy zoptymalizować takie czynniki, jak wektory plazmidowe, temperatura i induktory, aby zwiększyć ekspresję białka.

Yaohai Bio-Pharma aktywnie poszukuje również instytucjonalnych lub indywidualnych partnerów globalnych i oferuje najbardziej konkurencyjne wynagrodzenie w branży. Jeśli masz jakiekolwiek pytania, skontaktuj się z nami: [email protected]