Produkcja Białek Recombinantowych: Inżynieryjne Sztamy E. coli

Escherichia coli (E. coli) odegrała istotną rolę w produkowaniu białek rekombinacyjnych w przemyśle biotechnologicznym, będąc pierwszym wektorem ekspresyjnym do produkcji leków biologicznych. E. coli charakteryzuje się szybkim wzrostem, łatwą manipulacją genetyczną i szybką syntezą białek rekombinacyjnych, wśród innych zalet. Rozległe modyfikacje uczyniły z E. coli optymalny wybór do ekspresji białek, prowadząc do stworzenia różnych inżynieryjnych odmian E. coli.

Yaohai Bio-Pharma specjalizuje się w dostarczaniu kompleksowych usług outsourcingowych związanych z fermentacją, czystką, opracowaniem formuły procesowej oraz produkcją serii biopreparatów przy użyciu systemów ekspresji E. coli. Biorąc pod uwagę szeroki doświadczenie Yaohai, podsumowaliśmy, że cztery powszechne odmiany E. coli są wykorzystywane do produkcji białek rekombinacyjnych oraz ich cechy.

Odmiana BL 21

Pochodząca od linii E. coli B, szczep BL21 brakuje proteazy Lon i zewnętrznej membrany proteazy OmpT. Proteaza Lon przede wszystkim degradowuje białka eksogeniczne, podczas gdy OmpT głównie degradowuje białka macierzy ekstracelularnej. Brak tych dwóch kluczowych proteaz może skutecznie zapobiec degradacji białek rekombinacyjnych.

Szczep Origami

Szczep Origami, pochodny E. coli K-12, ma mutacje w reduktazie tioreksyny i reduktazie glutationu, które ułatwiają formowanie poprawnie złożonych białek zawierających wiązania disulfidowe oraz wzmacniają rozpuszczalność białek. Szczepy Origami, w tym Origami, Origami 2 i Origami B, są odpowiednie do wyrażania aktywnych białek zawierających wiązania disulfidowe.

Szczep SHuffle

Odmesz SHuffle konstytutywnie wyraża izomeraz wiązań disulfidowych DsbC w cytoplazmie, promując powstawanie poprawnych wiązań disulfidowych w utlenionych białkach. Służy również jako czynniki chaperonowy dla zgięcia białka, wspomagając tworzenie prawidłowej konformacji.

Odmesz Rosetta

Odmesz Rosetta uzupełnia E. coli o tRNA odpowiadające rzadkim kodonom, dążąc do poprawy poziomu ekspresji genów obcych, zwłaszcza genów eukariotycznych, w systemach prokariotycznych. Pochodzący od BL21 i noszący plazmid pRARE odporny na chloramfenikol, uzupełnia sześć tRNA odpowiadających rzadkim kodonom (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC i GGA), które pierwotnie brakowało w E. coli, oferując bardziej "powszechną" ekspresję białek.

Wnioski

Trzy główne czynniki wpływu na udane produkowanie białek rekombinacyjnych to gospodarz, wektor i warunki kultury. Na podstawie zrozumienia właściwości fizykochemicznych białka rekombinacyjnego, unikalnych przewag każdego szczepu oraz konkretnych potrzeb doświadczenia należy wybrać najbardziej odpowiedniego gospodarza. Ponadto należy zoptymalizować czynniki takie jak wektory plazmidowe, temperatura i indukery, aby poprawić ekspresję białka.

Yaohai Bio-Pharma aktywnie poszukuje globalnych partnerów instytucjonalnych lub indywidualnych i oferuje najbardziej konkurencyjne wynagrodzenie w branży. Jeśli masz jakiekolwiek pytania, prosimy o kontakt: [email protected]