Kontrola jakości i zastosowania białek rekombinacyjnych

Kontrola jakości rekombinacyjnych białek jest kluczowa dla wiarygodności i powtarzalności danych eksperymentalnych. Każdy krok, od projektowania do procesu produkcji, wymaga surowych strategii kontroli jakości.

Strategie Kontroli Jakości

Sektor przemysłowy stosuje ścisłe standardowe procedury operacyjne, podczas gdy społeczność akademicka musi wzbogacać profesjonalną wiedzę, aby poprawić powtarzalność danych. Białka o określonych zastosowaniach biologicznych lub cechach biochemicznych wymagają specjalnie dopasowanych strategii kontroli jakości (QC).

Trudne Przykłady i Rozwiązania

Yaohai Bio-Pharma dysponuje szerokim doświadczeniem w produkcji i oczyszczaniu rekombinacyjnych białek, a także zespołem ekspertów, co gwarantuje, że produkcja twojego białka zostanie wykonana z wysoką czystością. Korzystając z naszego doświadczenia zdobytego w setkach projektów, Yaohai uprzejmie podsumowuje, jak zoptymalizować oczyszczanie białek.

Białka Wiążące Kwas Nukleinowy: Kroki usunięcia kwasów nukleinowych, takie jak nukleazy lub osadzanie PEI, są niezbędne. Stosunek A260nm/A280nm jest monitorowany, aby wykryć zanieczyszczenie kwasami nukleinowymi.

Feroryna Ciężka Myszyno 1 dla krio-EM: Etapy oczyszczania muszą zostać zoptymalizowane, a nukleazy należy dodać, aby zmniejszyć stosunek A260nm/A280nm i zapewnić czystość białka.

Białko Chimeryczne Ludzkie dsRBEC: Lizys komórkowy używa bufora zawierającego ureę, po którym następuje refoldowanie na kolumnie w celu uzyskania funkcyjnie aktywnych białek.

Białka Wiążące Kationy Dwalencyjne: Podczas ekspresji i oczyszczania muszą być dodane określone kationy dwalencyjne, a chelatory powinno się unikać.

Białka Żelazowo-Siarkowe: Imidazole powinno się unikać, aby nie zakłócać klastra [2Fe ± 2S], co zapewnia poprawne fałdowanie i funkcjonowanie białka.

Rozpuszczalny Fragment LLT1: Projekt mutanta optymalizuje formowanie wiązań disulfidowych i fałdowanie białek, co prowadzi do stabilnych białek o wysokim uzysku.

Kryształografia kinazy CLK1: Współekspresja z λ-fosfatazą usuwa fosfany z lokalizacji fosforylacji, a chromatografia rozdziału według wagi molekularnej (SEC) i chromatografia wymiany anionowej są wykorzystywane do uzyskania jednorodnego CLK1 bez heterogenicznej fosforylacji.

Białka do użytku jako antigeny: Ocena czystości jest konieczna, aby uniknąć zanieczyszczeń białkami o dużej immunogeniczności. Dla antyciał przeciwko strukturowym epitopom musi zostać zachowana trójwymiarowa konformacja antigeny.

Białka podatne na agregację: Zastosowywane są strategie, takie jak przeszukiwanie różnych szczepów i obniżanie temperatury uprawy, aby ograniczyć problemy z agregacją, a także projektowane są szybkie metody oczyszczania.

Usuwanie endotoksyn: Metody, takie jak chromatografia ładunku dodatniego i chromatografia afinityczna z polianionowymi ligandami, usuwają endotoksyny, zapewniając, że poziomy LPS są poniżej granic aplikacyjnych.

Kompleksy białkowe: Podjednostki są wyrażane osobno i montowane in vitro lub wspólne wyrażone, aby utworzyć funkcjonalne kompleksy. Integralność kompleksu jest oceniana przez jednorodność i masę molową.

Wnioski

Produkcja białek zaczyna się od strategicznego projektowania, uwzględniając cechy biochemiczne i zastosowania. W trakcie ekspresji, oczyszczania i kontroli jakości warunki i metody są optymalizowane pod kątem stabilności, braku agregacji i stanu naturalnego. Oczyszczone białka służą różnym zastosowaniom dalej w procesie, takim jak charakterystyka biofizyczna.

Yaohai Bio-Pharma aktywnie poszukuje globalnych partnerów instytucjonalnych lub indywidualnych i oferuje najbardziej konkurencyjne wynagrodzenie w branży. Jeśli masz jakiekolwiek pytania, prosimy o kontakt: [email protected]