Kontrola jakości i zastosowania białek rekombinowanych

Kontrola jakości białek rekombinowanych jest kluczowa dla niezawodności i powtarzalności danych eksperymentalnych. Każdy krok, od projektu do procesu produkcyjnego, wymaga rygorystycznych strategii kontroli jakości.

Strategie kontroli jakości

Sektor przemysłowy przestrzega ścisłych standardowych procedur operacyjnych, podczas gdy społeczność akademicka musi zwiększyć wiedzę zawodową, aby poprawić powtarzalność danych. Białka o określonych zastosowaniach biologicznych lub cechach biochemicznych wymagają dostosowanych strategii kontroli jakości (QC).

Trudne przykłady i rozwiązania

Yaohai Bio-Pharma może pochwalić się bogatym doświadczeniem w produkcji i oczyszczaniu białek rekombinowanych, połączonym z zespołem ekspertów, co zapewnia, że ​​produkcja białka zostanie ukończona z wysoką czystością. Wykorzystując nasze doświadczenie z setek projektów, Yaohai uprzejmie podsumowuje, jak zoptymalizować oczyszczanie białek.

Białka wiążące kwasy nukleinowe: Konieczne są kroki usuwania kwasu nukleinowego, takie jak nukleazy lub wytrącanie PEI. Współczynnik A260nm/A280nm jest monitorowany w celu wykrycia zanieczyszczenia kwasem nukleinowym.

Ciężki łańcuch ferrytyny myszy 1 do kriomikroskopii elektronowej: Konieczna jest optymalizacja etapów oczyszczania oraz dodanie nukleaz w celu zmniejszenia stosunku A260nm/A280nm i zapewnienia czystości białka.

Chimeryczne białko ludzkie dsRBEC: Liza komórek polega na użyciu buforu zawierającego mocznik, a następnie na przeprowadzeniu refoldingu na kolumnie w celu uzyskania funkcjonalnie aktywnych białek.

Białka wiążące kationy dwuwartościowe: Podczas ekspresji i oczyszczania konieczne jest dodanie określonych kationów dwuwartościowych oraz unikanie stosowania środków chelatujących.

Białka żelazowo-siarkowe: Należy unikać stosowania imidazolu, aby zapobiec zakłóceniu klastra [2Fe ± 2S], co zapewni prawidłowe fałdowanie i funkcjonowanie białka.

Rozpuszczalny fragment LLT1: Mutacja optymalizuje tworzenie wiązań disiarczkowych i fałdowanie białek, co skutkuje uzyskaniem stabilnych białek o wysokiej wydajności.

Krystalizacja kinazy CLK1: Współekspresja z λ-fosfatazą usuwa fosforany z miejsc fosforylacji, a do uzyskania jednorodnej CLK1 bez heterogenicznej fosforylacji stosuje się chromatografię wykluczania wielkościowego (SEC) i chromatografię anionowymienną.

Białka do zastosowań antygenowych: Ocena czystości jest konieczna, aby uniknąć skażenia wysoce immunogennymi białkami. W przypadku przeciwciał epitopu strukturalnego należy zachować trójwymiarową konformację antygenu.

Białka podatne na agregację: W celu ograniczenia problemów z agregacją stosuje się takie strategie, jak przesiewanie różnych szczepów i obniżanie temperatur hodowli, a także opracowuje się strategie szybkiego oczyszczania.

Usuwanie endotoksyn: Metody takie jak chromatografia z ładunkiem dodatnim i chromatografia powinowactwa polikationowego ligandu usuwają endotoksyny, zapewniając, że poziomy LPS są niższe od dopuszczalnych limitów.

Kompleksy białkowe: Podjednostki są wyrażane oddzielnie i montowane in vitro lub współwyrażane w celu utworzenia kompleksów funkcjonalnych. Integralność kompleksu jest oceniana na podstawie jednorodności i masy molowej.

Podsumowanie

Produkcja białek zaczyna się od strategicznego projektowania, biorąc pod uwagę cechy biochemiczne i zastosowania. Podczas ekspresji, oczyszczania i kontroli jakości warunki i metody są optymalizowane pod kątem stabilności, braku agregacji i stanu natywnego. Oczyszczone białka służą różnym dalszym zastosowaniom, takim jak charakterystyka biofizyczna.

Yaohai Bio-Pharma aktywnie poszukuje również instytucjonalnych lub indywidualnych partnerów globalnych i oferuje najbardziej konkurencyjne wynagrodzenie w branży. Jeśli masz jakiekolwiek pytania, skontaktuj się z nami: [email protected]