Plazmid: mała, okrągła cząsteczka DNA o dużym potencjale

Plazmidy, małe koliste cząsteczki DNA, służą jako niezbędne wektory do rekombinacji DNA w badaniach biologii molekularnej i terapii genowej. Wydajność i jakość plazmidów są kluczowe, przy czym udział superskręconych cząsteczek i zawartość endotoksyn to dwa istotne czynniki wpływające na jakość plazmidów.

Podtypy plazmidów

Plazmidy wyekstrahowane z Escherichia coli (E. coli) występują w różnych podtypach: superskręcone (SC), otwarte koliste (OC) i liniowe (L) (Rysunek 1). Spośród nich plazmidy superskręcone wykazują doskonałą stabilność, antygenowość oraz wysoką wydajność transfeccji i ekspresji.

Rysunek 1. Schematyczny diagram powszechnych podtypów plazmidów

W elektroforezie żelu agarozowego DNA plazmidowego, kolejność migracji jest następująca: DNA superskręcone, DNA liniowe i DNA otwarte koliste (ryc. 2).

Rysunek 2. Wzór migracji różnych podtypów plazmidów uzyskany w elektroforezie w żelu agarozowym

Firma Yaohai Bio-Pharma nieustannie udoskonala swoje procesy i techniki, aby zapewnić, że odsetek plazmidów superskręconych w plazmidach klasy transfeccyjnej wynosi ≥85%, a w plazmidach klasy badawczej ≥50%. Poniżej przedstawiono przypadek (rysunek 3), w którym elektroforeza w żelu agarozowym jest połączona z oprogramowaniem Gel-Pro Analyzer w celu wykrycia odsetka plazmidów superskręconych.

Rysunek 3. Wyniki kontroli jakości proporcji superskręconej plazmidu

Endotoksyna

Endotoksyna, składnik ściany komórkowej bakterii Gram-ujemnych, składa się głównie z lipopolisacharydu A (LPS-A) jako toksycznego składnika. Podczas ekstrakcji plazmidu endotoksyna jest uwalniana do roztworu lizy, co poważnie wpływa na wydajność transfeccji plazmidu do komórek. Ponadto może aktywować niespecyficzne odpowiedzi immunologiczne w komórkach, co prowadzi do fałszywie dodatnich wyników w eksperymentach.

Yaohai Bio-Pharma przyjmuje podejście „bez wprowadzania” i „wysokiego usuwania”, ściśle kontrolując stosowanie odczynników i materiałów zawierających endotoksynę w całym procesie oczyszczania. Firma opracowała również skuteczną metodę usuwania endotoksyny, oferującą trzy poziomy zawartości endotoksyny: ≤0.1 EU/µg, ≤0.01 EU/µg i ≤0.005 EU/µg.

Yaohai Bio-Pharma posiada linię usług ekstrakcji plazmidów o wysokiej przepustowości, która jest w stanie dostarczyć 1 mg wyekstrahowanych plazmidów w ciągu zaledwie jednego tygodnia. Domyślnie zapewnia ponad siedem testów kontroli jakości (QC), aby zapewnić dostawę wysokiej jakości, wysokiej jakości plazmidów z wielu perspektyw.

Aktywnie poszukujemy także partnerów instytucjonalnych lub indywidualnych na całym świecie. Oferujemy najbardziej konkurencyjne wynagrodzenie w branży. Jeśli masz jakiekolwiek pytania, skontaktuj się z nami: [email protected]