Atklājot optimālo eGFP ziņotāja RNA dosēju

Molekularajā bioloģijā un bioteknoloģijā uzlabotais zaļais fluorescences proteīns (eGFP) ir kļuvis par būtisku atskaišņojošo gēnu, jo spēj radīt spožu zaļu fluorescenci 509 nm. Šis proteīns, kas sākotnēji tika izolēts no meduzas Aequorea victoria, ir tiešs detekcijas marķieris mammaliskajās šūnu kultūrās, ļaujot novērot un optimizēt transfekcijas efektivitāti. Tomēr rodas jautājums: kāda ir eGFP atskaišņojošā RNA optimālā daudzumā, lai sasniegtu vēlamo izteiksmes līmeni?

Pētījumi ir parādījuši, ka eGFP ziņotāja RNA efektivitāte lielā mērā atkarīga no tās dozes, īpaši cikliskās RNA (circRNA) un pašizplatnojošās mRNA (saRNA) sistēmu kontekstā. Pētījumi, kas veiktie Katrien Remaut komandas Gantas Universitātes Nanomedicīnas Pētījumu Grupā, ir uzsvēruši sarežģīto saites starp saRNA dozi un tās tulkošanas efektivitāti retinālas šūnās. Viņi atklāja, ka zemas saRNA dozes, zem innātas imūnsistēmas aktivācijas sliekšņa, ļauj sasniegt efektīvu proteīna izpausmi. Tas uzreiz parāda precīzas dozes kontroles nozīmi, lai pilnībā izmantotu eGFP ziņotāja RNA potenciālu.

Praktiskās lietošanas gadījumos eGFP mRNA parastajā koncentrācijā var būt no mikrogramiem (μg) līdz nanogramiem uz mikrolituру (ng/μL). Piemēram, transfekcijas eksperimentos ir pierādīts, ka 0,05 μg līdz 0,5 μg eGFP mRNA deva nozīmīgu izteiksmes līmeni dažādos šūnu tipos, ar pozitīvām šūnām sasniedzot līdz 99-100% noteiktos gadījumos. Vērtībām zem 0,1 μg saRNA parāda labākus izteiksmes līmeņus salīdzinājumā ar lineāru mRNA, demonstrējot savu pašpalielināšanās priekšrocību.

EGFP reporter RNA daudzfunkcionālība atrodas ne tikai tā spožajā un stabīlajā fluorescencē, bet arī tā spēlē pielāgoties dažādiem eksperimentālajiem iestatījumiem. Zinātnieki var precīzi pielāgot dosi, lai atbilstu savām specifiskajām vajadzībām, nodrošinot pilnīgu kontroli pārejas izteiksmes līmeņos. Šis elements padara eGFP par nepieredzamu rīku pētījumos par gēnu funkciju, šūnu liktena novērošanu un transfekcijas protokolu optimizāciju.

Kopumā, optimālais eGFP reporter RNA dosējums lieliski atkarīgs no eksperimentālās situācijas un vēlamajiem rezultātiem. Drosma izvēloties piemēroto dosi, zinātnieki var izmantot šīs daudzveidīgās reporter gēna pilno potenciālu, uzlabojot mūsu sapratni par molekulārām mehānismām un veicinot inovācijas biotehnoloģijā.

Yaohai Bio-Pharma ir pirmā un lielākā bioloģisko vielu uzņēmums, kas specializējas mikrobiālajā izpausmes sistēmā CRDMO lielājā Ķīnā. Mēs esam pievienojušies, lai apmierinātu kliniskos un tirdznieciskos vajadzības visu pasaulē esošajiem klientiem attiecībā uz bioloģiskajām medicīnas precēm, vakcinām un diagnostikas līdzekļiem cilvēku un veterinārā lietojumā.

Mēs aktīvi meklējam globālus partnerus, gan iestāžu, gan personīgu līmenī. Mēs piedāvājam nozīmē spēcīgāko atalgojumu. Ja jums ir jebkādas jautājumi, lūdzu, nerozdomājiet mūs sazināties: [email protected]