eGFP reportiera RNS optimālās devas atklāšana

Molekulārajā bioloģijā un biotehnoloģijā uzlabotais zaļais fluorescējošais proteīns (eGFP) ir kļuvis par galveno reportiera gēnu, jo tas spēj radīt spilgti zaļu fluorescenci pie 509 nm. Šis proteīns, kas sākotnēji izolēts no medūzas Aequorea victoria, ir tiešs noteikšanas marķieris zīdītāju šūnu kultūrās, kas atvieglo transfekcijas efektivitātes uzraudzību un optimizāciju. Tomēr rodas jautājums: kāda ir optimālā eGFP reportiera RNS deva, lai sasniegtu vēlamos ekspresijas līmeņus?

Pētījumi ir parādījuši, ka eGFP reportiera RNS efektivitāte lielā mērā ir atkarīga no tās devas, īpaši cirkulārās RNS (cirRNS) un pašpastiprinošās mRNS (saRNS) sistēmu kontekstā. Pētījumi, ko veica Katrien Remaut komanda Gentes Universitātes Nanomedicīnas pētniecības grupā, ir uzsvērusi sarežģīto saistību starp saRNS devu un tās translācijas efektivitāti tīklenes šūnās. Viņi atklāja, ka zemas saRNS devas, kas ir zemākas par iedzimtas imūnās aktivācijas slieksni, veicina efektīvu olbaltumvielu ekspresiju. Tas uzsver precīzas devas kontroles nozīmi, lai pilnībā izmantotu eGFP reportiera RNS potenciālu.

Praktiskā pielietojumā parasti lietotās eGFP mRNS koncentrācijas var svārstīties no mikrogramiem (μg) līdz nanogramiem uz mikrolitru (ng/μL). Piemēram, transfekcijas eksperimentos ir pierādīts, ka devas no 0.05, 0.5 μg līdz 99, 100 μg eGFP mRNS nodrošina ievērojamu ekspresijas līmeni dažādos šūnu veidos, un pozitīvo šūnu procentuālais daudzums dažos gadījumos sasniedz pat 0.1–XNUMX%. Jo īpaši, ja deva ir mazāka par XNUMX, XNUMX μg, saRNS uzrāda augstākus ekspresijas līmeņus, salīdzinot ar lineāro mRNS, parādot tās pašpastiprinošo priekšrocību.

eGFP reportiera RNS daudzpusība slēpjas ne tikai tās spilgtajā un stabilajā fluorescencē, bet arī tās pielāgošanās spējā dažādiem eksperimentāliem iestatījumiem. Pētnieki var precīzi pielāgot devu atbilstoši savām īpašajām vajadzībām, nodrošinot precīzu gēnu ekspresijas līmeņu kontroli. Šī funkcija padara eGFP par nenovērtējamu rīku gēnu funkciju pētīšanai, šūnu likteņa uzraudzībai un transfekcijas protokolu optimizēšanai.

Noslēgumā jāsaka, ka optimālā eGFP reportiera RNS deva ir ļoti atkarīga no eksperimentālā konteksta un vēlamajiem rezultātiem. Rūpīgi izvēloties atbilstošo devu, pētnieki var pilnībā izmantot šī daudzpusīgā reportiera gēna potenciālu, uzlabojot mūsu izpratni par molekulārajiem mehānismiem un virzot inovācijas biotehnoloģijā.

Yaohai Bio-Pharma ir pirmā un lielākā bioloģiskā viela, kas veltīta mikrobu ekspresijas sistēmai CRDMO Lielajā Ķīnā. Mēs esam apņēmušies apmierināt mūsu globālo klientu klīniskās un komerciālās vajadzības attiecībā uz bioloģiskām zālēm, vakcīnām un diagnostiku cilvēkiem un veterinārijā.

Mēs arī aktīvi meklējam institucionālus vai individuālus globālus partnerus. Mēs piedāvājam konkurētspējīgāko atalgojumu nozarē. Ja jums ir kādi jautājumi, lūdzu, sazinieties ar mums: [email protected]