EGFP mRNA ražošanas process

EGFP (Papildināta Zaļā Fluorescentā Proteīna) mRNA ražošana ietver seriju molekulu bioloģijas tehnoloģiju, lai radītu funkcionālu RNA molekulu, kas kodē eGFP izpausē. eGFP mRNA jomā Yaohai Bio-Pharma ir uzkrājusi plašu pieredzi, atbilstot klientu specifiskajiem prasībām. Atbalstoties uz mūsu pieredzi, mēs esam sintetizējuši EGFP mRNA ražošanas procesa plūsmu.

1. EGFP Gena Klonēšana : Lai to iegūtu, nepieciešamo eGFP kodējošo gēnu secību. Šis genes parasti klonē no jau esošās plazmīda vektora vai sintetizē artificiāli, pamatojoties uz zināmo nukleotīdu secību. Klonētais genes pēc tam tiek pārbaudīts sekvencēšanā, lai nodrošinātu precizitāti.
2. Genes Optimizācija Izpausēm : Lai sasniegtu optimālu izteiksmi mērķa sistēmā (piem., sievišķajos šūnās, baktērijās vai in vitro transkripcijas sistēmās), eGFP gēns var tikt kodonu optimizēts. Tas ietver retiem kodoniem oriģinālajā secībā aizstāšanu ar vairāk bieži lietotiem kodoniem mazgājošā organismā, palielinot efektīvas translacijas iespējas.
3. In vitro Transkripcijas veidnes sagatavošana : Kad optimizētais genes ir gatavs, tas tiek iekļauts piemērotā vektorā, bieži vien plazmīdē, kas satur nepieciešamos regulējošos elementus transkripcijai (piem., promotorsekansi). Šī plazmīde dienesta kā in vitro transkripcijas veidne.
4. In vitro Transkripcija : Izmantojot sagatavoto plazmīda šablonu, ārpus dzīvības notiek transkripcija, lai sintetizētu eGFP mRNA. Šis process ietver RNA polimerāze enzīmu izmantošanu, kuri pazīst promotorsekvenci un sāk transkripciju, ražojot komplementāru RNA šķiedri DNS šablonam. Atkarībā no vēlamo lietojuma, mRNA var būt apkalpotas, poliadenilētas un/vai modificētas, lai uzlabotu stabilitāti un tulkotāja efektivitāti.
5. Tīrīšana un kvalitātes kontrole : Sintetizētā eGFP mRNA pēc tam tiek tīrīta, lai noņemtu visus piesārņojumus, tostarp DNR, daudzveidības proteīnus un brīvus nukleotīdus. Tīrīšanas metodes var ietvert geliera elektrofozę, kolonnas hromatogrāfiju vai daļām balstītu atdalīšanu. Pēc tīrīšanas mRNA tiek analizēta kvalitātei, ieskaitot koncentrāciju, tīrību un integritāti, izmantojot metodes, piemēram, UV-Vid spektrofotometriju un geliera elektrofozi.
6. Glabāšana un piegāde : Tīrtais eGFP mRNA parasti tiek glabāts zemās temperatūrās, lai saglabātu stabilitāti. Eksperimenta izmantošanai mRNA var tikt ieviesta šūnās, izmantojot dažādas metodes, ieskaitot elektroporāciju, lipofekciju vai viruza veidotus vektorus, atkarībā no konkrētās lietojumprogrammas un mērķa šūnu veida.
7. Izpausme un pārbaude : Kad tas ir iekšpusē šūnā, eGFP mRNA tiek translatēta uz uzlaboto zaļo fluorescensojošo oliecību, kuru var redzēt, izmantojot fluorescensojošo mikroskopiju. Tas ļauj pārbaudīt veiksmīgu mRNA ražošanu, piegādi un izpausmi.

Kopsavilkumā eGFP mRNA ražošana ietver gēna klonēšanu, tā optimizēšanu izpausmes nolūkiem, in vitro transkripcijas šablonu sagatavošanu, transkripcijas reakciju veikšanu, rezultāta mRNA purifikāciju un beidzot to ievietošanu šūnās izpausmes un pārbaudes nolūkā.

Mēs aktīvi meklējam globālus partnerus, gan iestāžu, gan personīgu līmenī. Mēs piedāvājam nozīmē spēcīgāko atalgojumu. Ja jums ir jebkādas jautājumi, lūdzu, nerozdomājiet mūs sazināties: [email protected]