eGFP mRNS ražošanas process

eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNS ražošana ietver virkni molekulārās bioloģijas metožu, lai radītu funkcionālu RNS molekulu, kas kodē eGFP ekspresiju. eGFP mRNS jomā Yaohai Bio-Pharma ir uzkrājusi plašu pieredzi klientu specifisko vajadzību apmierināšanā. Izmantojot savu pieredzi, mēs esam sintezējuši procesa plūsmu EGFP mRNS ražošanai.

1. eGFP gēna klonēšana: lai iegūtu gēnu secību, kas kodē eGFP. Šis gēns parasti tiek klonēts no jau esoša plazmīdas vektora vai mākslīgi sintezēts, pamatojoties uz zināmo nukleotīdu secību. Pēc tam klonētais gēns tiek pārbaudīts, veicot secību, lai nodrošinātu precizitāti.
2. Gēnu optimizācija ekspresijai: Optimālai ekspresijai mērķa sistēmā (piemēram, zīdītāju šūnās, baktērijās vai in vitro transkripcijas sistēmās) eGFP gēnam var tikt veikta kodona optimizācija. Tas ietver reto kodonu aizstāšanu sākotnējā secībā ar biežāk izmantotajiem saimniekorganismā, palielinot efektīvas translācijas iespējas.
3. In vitro Transkripcijas veidnes sagatavošana: Kad optimizētais gēns ir gatavs, tas tiek iekļauts piemērotā vektorā, bieži vien plazmīdā, kas satur transkripcijai nepieciešamos regulējošos elementus (piemēram, promotora secību). Šī plazmīda kalpo kā veidne in vitro transkripcijai.
4. In vitro transkripcija: Izmantojot sagatavoto plazmīdas šablonu, tiek veikta in vitro transkripcija, lai sintezētu eGFP mRNS. Šis process ietver RNS polimerāzes enzīmu izmantošanu, kas atpazīst promotora secību un uzsāk transkripciju, radot komplementāru RNS virkni DNS veidnei. Atkarībā no vēlamā pielietojuma mRNS var būt pārklāts, poliadenilēts un/vai modificēts, lai uzlabotu stabilitāti un translācijas efektivitāti.
5. Attīrīšana un kvalitātes kontrole: Sintezētā eGFP mRNS pēc tam tiek attīrīta, lai noņemtu visus piesārņotājus, tostarp DNS, proteīnus un brīvos nukleotīdus. Attīrīšanas metodes var ietvert gēla elektroforēzi, kolonnu hromatogrāfiju vai atdalīšanu uz lodītēm. Pēc attīrīšanas mRNS tiek analizēta attiecībā uz kvalitāti, tostarp koncentrāciju, tīrību un integritāti, izmantojot tādas metodes kā UV-Vis spektrofotometrija un gēla elektroforēze.
6. Uzglabāšana un piegāde: Attīrīto eGFP mRNS parasti uzglabā zemā temperatūrā, lai saglabātu stabilitāti. Eksperimentālai lietošanai mRNS var ievadīt šūnās, izmantojot dažādas metodes, tostarp elektroporāciju, lipofekciju vai vīrusu vektorus, atkarībā no konkrētā pielietojuma un mērķa šūnas veida.
7. Izteikšana un pārbaude: Iekļūstot šūnā, eGFP mRNS tiek pārvērsta uzlabotā zaļā fluorescējošā proteīnā, ko var vizualizēt, izmantojot fluorescences mikroskopiju. Tas ļauj pārbaudīt veiksmīgu mRNS ražošanu, piegādi un ekspresiju.

Rezumējot, eGFP mRNS ražošana ietver gēna klonēšanu, optimizēšanu ekspresijai, in vitro transkripcijas šablona sagatavošanu, transkripcijas reakcijas veikšanu, iegūtās mRNS attīrīšanu un visbeidzot tās nogādāšanu šūnās ekspresijai un pārbaudei.

Mēs arī aktīvi meklējam institucionālus vai individuālus globālus partnerus. Mēs piedāvājam konkurētspējīgāko atalgojumu nozarē. Ja jums ir kādi jautājumi, lūdzu, sazinieties ar mums: [email protected]