Atklājiet augstas kvalitātes plazmīdu ekstrakcijas noslēpumus

Plazmīdu ekstrakcija ir ļoti svarīga pētniekiem. Plazmīdas kā gēnu vektori ir ļoti svarīgas vakcīnu izpētē un gēnu terapijā, kur kvalitātei ir nozīme. Galvenie kvalitātes faktori ietver superspirāles proporciju un endotoksīnu saturu. Noteikumi atšķiras: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, ar <5% lineāra/atvērta apļa DNS. Klienti bieži dod priekšroku ≥95% supercoiled. Endotoksīnu līmeņi ir: pētījumi (>50 EU/µg), transfekcija (<50 EU/µg) un endotoksīnu nesaturoši (<0.1 EU/µg).

Superspirēta plazmīda DNS

Escherichia coli plazmīdas ietver superspirālu (SC), atvērtu apļveida (OC) un lineāru (L) DNS. Augsta SC proporcija palielina transfekcijas efektivitāti un izteiksmi. Piemēram, 85.45% SC plazmīdas transfekcija ir 2.5 reizes lielāka, un 93.28% SC plazmīdas HGF ekspresija ir 1.8 reizes lielāka, apstiprinot SC DNS pārākumu.

Atvērta apļveida DNS: kad pārtrūkst viena divpavedienu DNS virkne, superspirālā struktūra kļūst vaļīga, veidojot atvērtu apļveida plazmīdu ar lielāku tilpumu, kas elektroforēzes laikā migrē vislēnāk un atrodas augšpusē.

Lineāra DNS: kad pārtrūkst abas plazmīdas DNS virknes, veidojas lineāra struktūra ar relatīvi mazāku tilpumu, kas migrē ātrāk nekā atvērtā apļveida DNS, bet lēnāk nekā superspirēta DNS, kas atrodas otrajā vietā.

Superspirēta DNS: divas spirāles savijas, savērpjoties superspirālā struktūrā, kuras pamatā ir DNS spirāle. Tam ir mazākais tilpums un tas visstraujāk migrē elektroforēzes laikā, novietots apakšā.

Supercoiled proporcijas kvantitatīvā analīze

Laboratorijās tiek izmantota agarozes gēla elektroforēze (AGE) un Gel-Pro Analyzer, lai novērtētu superspirāles proporciju, izmantojot elektroforēzes attēlus. Vienā attēlā redzami 97.539% SC DNS, bet citā - 63.833% SC un 36.167% OC DNS (lineārā DNS nav redzama).

Endotoksīna noslēpums plazmīdās

Endotoksīns ir gramnegatīvo baktēriju šūnu sienas ārējā slāņa sastāvdaļa, kas izdalās pēc baktēriju nāves vai līzes un satur toksisku lipopolisaharīdu A. Plazmīdas ekstrakcijas laikā endotoksīns nonāk līzes šķīdumā, ietekmējot transfekcijas efektivitāti un izraisot nespecifiskas imūnās atbildes reakcijas. uz viltus pozitīviem rezultātiem eksperimentos.

Endotoksīna kvantitatīvā un kvalitatīvā analīze

Limulus amebocyte lysate (LAL) tests nosaka endotoksīnu, aglutinējot ar 2-keto-3-deoksioktonskābi (KDO) lipopolisaharīdā (LPS). Tas ir kvalitatīvs un daļēji kvantitatīvs, kas norāda uz endotoksīna klātbūtni koagulācijas vai krāsas maiņas rezultātā, sajaucot ar paraugiem.

Yaohai Bio-Pharma piedāvā endotoksīnu nesaturošas superspirētas plazmīdas. Ārpakalpojumi Yaohai palielina transfekcijas un izteiksmes efektivitāti. Piegādātajām plazmīdām ir ≥95% SC proporcija (vidēji 85%±10%) un endotoksīnu līmenis ≤0.1, ≤0.01 vai ≤0.005 EU/μg.

Mēs arī aktīvi meklējam institucionālus vai individuālus globālus partnerus. Mēs piedāvājam konkurētspējīgāko atalgojumu nozarē. Ja jums ir kādi jautājumi, lūdzu, sazinieties ar mums: [email protected]