Atklājot augstas kvalitātes plazmīdu izņemšanas noslēpumus

Plazmīdu izņemšana ir būtiska pētniekiem. Kā gēnu vektori plazmīdas ir vitālas vakcinu pētījumos un gēnu terāpē, kur kvalitāte ir nozīmīga. Galvenie kvalitātes faktori ietver superlīkto proporciju un endotoksiņu saturu. Regulācijas atšķiras: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, ar <5% līnijas/atraktais cirkulārs DNS. KlIENTI bieži vēlas ≥95% superlīkto. Endotoksiņu līmeņi ir: pētnieciskajam lietojumam (>50 EU/µg), transfekcijai (<50 EU/µg) un bez endotoksiņiem (<0.1 EU/µg).

Superlīktais Plazmīdu DNS

Escherichia coli plazmīdas ietver superlīkto (SC), atraktais cirkulāru (OC) un līnijas (L) DNS. Augstas SC proporcijas palielina transfekcijas efektivitāti un izpausmi. Piemēram, 85.45% SC plazmīdas transfekcija ir par 2.5 reizes augstāka, un 93.28% SC plazmīdas HGF izpausme ir par 1.8 reizes augstāka, apstiprinot SC DNS uzvaru.

Atvērta apļveida DNS: Kad viena divstrūku DNS cēlme sagriežas, superaplīstā struktūra kļūst vieglākā, veidojot atvērtu apļveida plazmidu ar lielāku tilpumu, kas migrē lēnāk elektrofozę un atrodas augšpusē.

Līnijveida DNS: Kad abas plazmīda DNS cēlmes sagriežas, rodas līnijveida struktūra, ar relatīvi mazāku tilpumu, kas migrē ātrāk nekā atvērta apļveida DNS, bet lēnāk nekā superaplīstā DNS, atrodas otrajā vietā.

Superaplīstā DNS: Divi heliksi savienojas, aplīstot superaplīstā struktūrā uz DNS heliksa bāzes. Tā ir ar mazāko tilpumu un migrē ātrāk elektrofozę, atrodas apakšpusē.

Kvantitatīvais superaplīstās proporcijas analīzes novērtējums

Laboratorijas izmanto agaroselektrofozi (AGE) un Gel-Pro Analyzer, lai pēc elektrofozes attēliem novērtētu superaplīstās proporcijas. Viens attēls parāda 97,539% SC DNS, kamēr cits parāda 63,833% SC un 36,167% OC DNS (līnijveida DNS nav redzama).

Endotoxīnu slepenā plazmīdos

Endotokss ir komponents no Gram-negatīvo baktēriju šūnu sienas ārējās slāpekļa, kas atbrīvots pēc baktēriju nāves vai lizēšanas un satur toksisku lipopolisahāridu A. Plazmīdu izņemšanas laikā endotokss iekļaujas lizēšanas risinājumā, ietekmējot transfekcijas efektivitāti un izraisot nespecifiskus imūnreakciju, kas var izraisīt eksperimentālās nepareizas pozitīvas reakcijas.

Kvalitatīva un kvantitatīva analīze endotoksam

Limula amebocītu lizejs (LAL) testis noteica endotoksus ar 2-keto-3-deoksioktonā skābi (KDO) no lipopolisahāridiem (LPS), veicot aglutināciju. Tas ir kvalitatīvs un semikvantitatīvs, parādot endotoksu klātbūtni caur sadraudzēšanos vai krāsu maiņu, ja to sajaukst ar paraugiem.

Yaohai Bio-Pharma piedāvā endotoxinbrīvus superplaktuotos plazmidus. Delegējot darbu Yaohai, tiek uzlabota transfekcijas un izpausmes efektivitāte. Piegādātie plazmidi satur ≥95% SC proporciju (vidēji 85%±10%) un endotoksu līmeņus ≤0.1, ≤0.01 vai ≤0.005 EU/μg.

Mēs aktīvi meklējam globālus partnerus, gan iestāžu, gan personīgu līmenī. Mēs piedāvājam nozīmē spēcīgāko atalgojumu. Ja jums ir jebkādas jautājumi, lūdzu, nerozdomājiet mūs sazināties: [email protected]