Rekombinanto proteīnu kvalitātes kontrole un pielietojumi

Rekombinanto proteīnu kvalitātes kontrolei ir izšķiroša nozīme eksperimentālo datu ticamībā un reproducējamībā. Katrs solis, sākot no projekta izstrādes līdz ražošanas procesam, prasa stingras kvalitātes kontroles stratēģijas.

Kvalitātes kontroles stratēģijas

Rūpniecības sektors ievēro stingras standarta darbības procedūras, savukārt akadēmiskajai sabiedrībai ir jāuzlabo profesionālās zināšanas, lai uzlabotu datu reproducējamību. Proteīniem ar specifiskiem bioloģiskiem pielietojumiem vai bioķīmiskām īpašībām ir nepieciešamas pielāgotas kvalitātes kontroles (QC) stratēģijas.

Izaicinoši piemēri un risinājumi

Yaohai Bio-Pharma lepojas ar plašu pieredzi rekombinanto proteīnu ražošanā un attīrīšanā, apvienojumā ar ekspertu komandu, nodrošinot, ka jūsu olbaltumvielu ražošana tiek pabeigta ar augstu tīrības pakāpi. Izmantojot simtiem projektu pieredzi, Yaohai laipni apkopo, kā optimizēt olbaltumvielu attīrīšanu.

Nukleīnskābes saistošie proteīni: Ir nepieciešami nukleīnskābju noņemšanas soļi, piemēram, nukleāzes vai PEI izgulsnēšana. A260nm/A280nm attiecība tiek uzraudzīta, lai noteiktu nukleīnskābju piesārņojumu.

Peles feritīna smagā ķēde 1 krio-EM: Attīrīšanas posmi ir jāoptimizē un jāpievieno nukleāzes, lai samazinātu A260nm/A280nm attiecību un nodrošinātu olbaltumvielu tīrību.

Cilvēka himēriskais proteīns dsRBEC: Šūnu lizēšanai tiek izmantots buferšķīdums, kas satur urīnvielu, kam seko pārlocīšana kolonnā, lai iegūtu funkcionāli aktīvus proteīnus.

Olbaltumvielas, kas saista divvērtīgos katjonus: Ekspresijas un attīrīšanas laikā jāpievieno specifiski divvērtīgi katjoni, un jāizvairās no helātus veidojošiem līdzekļiem.

Dzelzs-sēra proteīni: Jāizvairās no imidazola lietošanas, lai novērstu [2Fe ± 2S] klastera darbības traucējumus, nodrošinot pareizu olbaltumvielu locīšanu un darbību.

LLT1 šķīstošais fragments: Mutantu dizains optimizē disulfīda saišu veidošanos un olbaltumvielu locīšanu, kā rezultātā tiek iegūti stabili un augstas ražas proteīni.

CLK1 kināzes kristalizācija: Koekspresija ar λ-fosfatāzi noņem fosfātus no fosforilēšanas vietām, un, lai iegūtu homogēnu CLK1 bez neviendabīgas fosforilācijas, tiek izmantota izmēra izslēgšanas hromatogrāfiju (SEC) un anjonu apmaiņas hromatogrāfiju.

Proteīni antigēnu lietošanai: Tīrības novērtējums ir nepieciešams, lai izvairītos no piesārņojuma ar ļoti imunogēnām olbaltumvielām. Strukturālām epitopa antivielām ir jāsaglabā antigēna trīsdimensiju konformācija.

Agregācijai pakļauti proteīni: Lai ierobežotu agregācijas problēmas, tiek izmantotas tādas stratēģijas kā dažādu celmu skrīnings un kultivēšanas temperatūras pazemināšana, un tiek izstrādātas ātras attīrīšanas stratēģijas.

Endotoksīnu noņemšana: Tādas metodes kā pozitīvā lādiņa hromatogrāfija un polikationu ligandu afinitātes hromatogrāfija noņem endotoksīnus, nodrošinot, ka LPS līmenis ir zem lietošanas robežām.

Olbaltumvielu kompleksi: Apakšvienības tiek izteiktas atsevišķi un saliktas in vitro vai koekspresētas, veidojot funkcionālus kompleksus. Kompleksa integritāti novērtē pēc viendabīguma un molārās masas.

Secinājumi

Olbaltumvielu ražošana sākas ar stratēģisku dizainu, ņemot vērā bioķīmiskās īpašības un pielietojumu. Ekspresijas, attīrīšanas un kvalitātes kontroles laikā apstākļi un metodes ir optimizētas stabilitātei, neagregācijai un dabiskajam stāvoklim. Attīrīti proteīni kalpo dažādiem pakārtotiem lietojumiem, piemēram, biofizikālajam raksturojumam.

Yaohai Bio-Pharma arī aktīvi meklē institucionālus vai individuālus globālus partnerus un piedāvā viskonkurētspējīgāko atlīdzību nozarē. Ja jums ir kādi jautājumi, lūdzu, sazinieties ar mums: [email protected]