Optimizācija rekombinantu cilvēka insulīna tīrīšanas procesam

Pēdējos gados diabēta pacientu pieaugums ir veicinājis insulīna pieprasījumu, tomēr pieejams insulīns ir par maz. Eficents un ekonomisks insulīna ražošanas process ir ļoti svarīgs. Tajā galvenokārt tiek izmantotas Escherichia coli (E. coli) un rauga šķirnes dēļ tās strauji augošajām īpašībām un zemajiem ražošanas izmaksām, taču E. coli sastopas ar sarežģītu pēcpuses apstrādi.

Pārskats par pēcpuses apstrādi:

Rekombinanta cilvēka insulīna atsevišķošana no E. coli iekļautās masas ietver vairākas darbības, tostarp atgūšanu, mazgāšanu, šķīdināšanu un oksidāciju, sadalīšanu, bufera maiņu, hromatogrāfisko atsevišķošanu, kristalizāciju, renatūrāciju, enzimatisko sadalīšanu un formulēšanu.

Yaohai Bio-Pharma spēj uzrunāt plašu pieredzi rekombinanta insulīna ražošanas un atsevišķošanas jomā, kā arī balstīties uz ekspertu komandu, kas nodrošina jūsu insulīna ražošanas procesa efektivitāti. Atbalstoties uz simtiem veiktajiem projektu, Yaohai laipni sausa, kā optimizēt rekombinanta cilvēka insulīna pēcpuses atsevišķošanas procesu.

Iekļūšanas ķermeņu atjaunošana un mazgāšana:

Lietot tiek mehāniskie metodes (piemēram, ultrakvēnu vai augstspiediena homogenizācija) vai lizosīna apstrāde, lai sadalītu šūnas, pēc tam izmanto mazgāšanas buferus (kas satur ureu, Triton X-100 utt.), lai noņemtu nevajadzīgos vielas. Mazgāšanas laikā parametri jāoptimizē, lai nodrošinātu proteīna kvalitāti, vienlaikus kontrolējot izmaksas.

Iekļūšanas ķermeņu dissocierēšana un oksidācija:

Augstas koncentrācijas denatūranti (piemēram, guanīda hidrohlorskābe vai urea) tiek izmantoti, lai disociētu iekļūšanas ķermenus, pievienojot ditiotretitolu vai β-merkaptetanolu, lai novērstu nepareizu disulfīda saites veidošanos. pH un temperatūra nozīmīgi ietekmē dissocierēšanas un oksidācijas reakcijas.

Atdalīšana un buferu maiņa:

Cianogēna bromīda šķelšana tiek izmantota, lai noņemtu N-termiņa sākotnējo aminoskati, taču tā rada toksiskumu un zemas specifitātes problēmas. Ar dialīzi, ultrafiltrāciju vai izmēru atdalīšanas hromatogrāfiju Buferu maiņa noņem kaitīgus reagentus, sagatavojot procesu nākamajiem posmiem.

Hromatogrāfiskās tīrīšanas un izkristalizēšanas metodes:

Lai tīrītu insulīnu, tiek izmantotas dažādas hromatogrāfiskās tehnoloģijas, ieskaitot afinitātes hromatogrāfiju, jonu maiņas hromatogrāfiju, atpakaļfāzes hromatogrāfiju, hidrofobās interakcijas hromatogrāfiju un izmēru atdalīšanas hromatogrāfiju. Izkristalizēšanas metodes, piemēram, pH izkristalizēšana un zinka kristalizācija, tiek izmantotas, lai noņemtu nevienkāršības un koncentrētu olbaltumvielas.

Renatūrācija:

Olbaltumvielas, kas ir attaisinātas, tiek diluētas renatūrācijas buferā, lai veicinātu pareizo disulfīda saites un olbaltumvielas savilciena formēšanos. Olbaltumvielas savilciena likvidāhromatogrāfija un dialīze ir arī metodes, kas tiek izmantotas renatūrācijai.

Eozīmiskā šķelšana un formulēšana:

Tripsīns un karboksipeptidāze B tiek izmantotas, lai sadalītu C-peptīdu, veidojot aktīvo insulīna heterodimeru. Galu galā tiek izmantotas kristalizācija un liofilizācija, lai noņemtu atlikušos sāli un buferus, sagatavojot stabili formulāciju. Pievienoti specifiski pievienojumi (piemēram, zinks un protamins), lai atbilstu dažādiem kliniskajiem vajadzībām.

Secinājums:

Insulīna turpinājuma apstrāde no E. coli ir sarežģīta. Nākotnes uzmanības fokuss vajadzētu būt šo posmu optimizēšanai, lai nodrošinātu efektīvu un ekonomisku ražošanu, kas atbilst prasībām un samazina izmaksas.

Yaohai Bio-Pharma arī aktīvi meklē pasaules līmenī iestāžu vai personiskus partnerus, piedāvājot visaugstāko atalgojumu no_brīvās_tirgus. Ja jums ir kādi jautājumi, lūdzu, nekavējoties sazinieties ar mums: [email protected]