Rekombinantā cilvēka insulīna attīrīšanas procesa optimizēšana

Pēdējos gados cukura diabēta pacientu pieaugums ir veicinājis pieprasījumu pēc insulīna, taču par pieejamu insulīnu trūkst. Izšķiroša nozīme ir efektīvai, ekonomiskai insulīna ražošanai. To galvenokārt ražo ar Escherichia coli (E. coli) un rauga palīdzību straujās augšanas un zemo izmaksu dēļ, E. coli saskaras ar sarežģītu pakārtotu apstrādi.

Pārskats par pakārtoto apstrādi:

Rekombinantā cilvēka insulīna attīrīšana no E. coli iekļaušanas ķermeņiem ietver vairākus posmus, tostarp atgūšanu, mazgāšanu, šķīdināšanu un oksidēšanu, šķelšanu, bufera apmaiņu, hromatogrāfisko attīrīšanu, izgulsnēšanu, renaturāciju, fermentatīvo šķelšanu un formulēšanu.

Yaohai Bio-Pharma lepojas ar plašu pieredzi rekombinantā insulīna ražošanā un attīrīšanā, apvienojumā ar ekspertu komandu, nodrošinot, ka insulīna ražošana tiek pabeigta ar augstu efektivitāti. Izmantojot simtiem projektu pieredzi, Yaohai laipni apkopo, kā optimizēt rekombinantā cilvēka insulīna pakārtoto attīrīšanas procesu.

Iekļaušanas ķermeņa atjaunošana un mazgāšana:

Šūnas tiek izjauktas, izmantojot mehāniskas metodes (piemēram, ultraskaņu, augsta spiediena homogenizāciju) vai apstrādi ar lizocīmu, kam seko mazgāšanas buferi (kas satur urīnvielu, Triton X-100 utt.), lai noņemtu piemaisījumus. Mazgāšanas laikā ir jāoptimizē parametri, lai nodrošinātu olbaltumvielu kvalitāti, vienlaikus kontrolējot izmaksas.

Iekļaušanas ķermeņa šķīdināšana un oksidēšana:

Augstas koncentrācijas denaturantus (piemēram, guanidīna hidrohlorīdu un urīnvielu) izmanto, lai izšķīdinātu ieslēguma ķermeņus, pievienojot ditiotreitolu vai β-merkaptoetanolu, lai novērstu nepareizu disulfīda saišu veidošanos. pH un temperatūra būtiski ietekmē šķīdināšanas un oksidācijas reakcijas.

Šķelšana un bufera apmaiņa:

Cianogēna bromīda šķelšanu izmanto, lai noņemtu N-gala iniciējošo aminoskābi, taču tā rada toksicitātes un zemas specifiskuma problēmas. Izmantojot dialīzi, ultrafiltrāciju vai izmēru izslēgšanas hromatogrāfiju, bufera apmaiņa noņem kaitīgos reaģentus, gatavojoties turpmākajām operācijām.

Hromatogrāfiskā attīrīšana un izgulsnēšana:

Insulīna attīrīšanai izmanto vairākas hromatogrāfijas metodes, tostarp afinitātes hromatogrāfiju, jonu apmaiņas hromatogrāfiju, apgrieztās fāzes hromatogrāfiju, hidrofobās mijiedarbības hromatogrāfiju un izmēru izslēgšanas hromatogrāfiju. Piemaisījumu noņemšanai un olbaltumvielu koncentrēšanai tiek izmantotas nogulsnēšanas metodes, piemēram, pH izgulsnēšana un cinka kristalizācija.

Renaturācija:

Izšķīdinātais proteīns tiek atšķaidīts renaturācijas buferšķīdumā, lai veicinātu pareizu disulfīda saišu veidošanos un olbaltumvielu locīšanu. Proteīnu saliekamā šķidruma hromatogrāfija un dialīze ir arī metodes, ko izmanto renaturācijai.

Fermentatīvā šķelšanās un formulēšana:

C-peptīda šķelšanai izmanto tripsīnu un karboksipeptidāzi B, veidojot aktīvo insulīna heterodimēru. Visbeidzot, kristalizāciju un liofilizāciju izmanto, lai noņemtu atlikušos sāļus un buferus, sagatavojot stabilu preparātu. Lai apmierinātu dažādas klīniskās vajadzības, tiek pievienotas īpašas piedevas (piemēram, cinks un protamīns).

Secinājums:

Pakārtotā insulīna apstrāde no E. coli ir sarežģīta. Nākotnē jākoncentrējas uz šo darbību optimizēšanu efektīvai, ekonomiskai ražošanai, lai apmierinātu pieprasījumu un samazinātu izmaksas.

Yaohai Bio-Pharma arī aktīvi meklē institucionālus vai individuālus globālus partnerus un piedāvā viskonkurētspējīgāko atlīdzību nozarē. Ja jums ir kādi jautājumi, lūdzu, sazinieties ar mums: [email protected]