Sveiki. Ar kada susimąstėte, kaip mokslininkai gali klonuoti RNR? RNR yra ši ypatinga molekulė, kurią randame savo ląstelėse, kuri atlieka daugybę dalykų, kad gamintų baltymus, o baltymai yra tam, kad mūsų kūnas galėtų daryti viską, ką reikia. Šioje dalyje mes apžvelgsime kur kas įdomesnį tyrėjų naudojamą protokolą: In vitro transkriptą. Ir viskas, kas reiškia, yra tai, kad mokslininkai ima RNR ir daug jos gamina mėgintuvėlyje (tai yra šis mažas stiklainis, kurį naudoja laboratorijos), todėl leiskite pereiti prie kiekvieno žingsnio čia.
Baigęs savo ankstesnį įrašą, supratau, kad paskutinis galėjo būti šiek tiek sausas, prisijunkite prie linksmybių šlapioje laboratorijoje; taigi, atsižvelgiant į formą dabar, kai jau tikrai esate linksmame (sic RNR gamybos) traukinyje: kokių reagentų ir kt reikės jūsų EF? Norėdami tai padaryti, mums reikės specialių baltymų, vadinamų fermentais, identiškų Yaohai produktui Rekombinantinė Midkine gamyba. Jis katalizuoja chemines reakcijas, šie fermentai padeda suskaidyti. Taigi dabar mums tiesiog reikia mūsų DNR dalies. Ši funkcija yra DNR, kurią naudojame kaip šabloną savo RNR kopijavimui. Taip pat reikalingos papildomos reguliavimo sekos RNR, būtent nukleotidai. Šie nukleotidai yra tarsi maži statybiniai blokai, kuriuos reikia surinkti, kad susidarytų RNR. Taip pat naudojame trumpus mažo skersmens vamzdelius, kad skonio įvertinimas būtų susuktas į kitus. Galiausiai mums reikia mašinos (termociklerio), kuri užtikrintų, kad mūsų reakcijos būtų tinkamos temperatūros. Be to, bet kokiems eksperimentams gali prireikti kelių įrankių ir produktų.
Taigi čia viskas skiriasi, turime vieną RNR grandinę ir dabar norime turėti daugiau jos kopijų, taip pat Konjuguotų VLP vakcinų gamyba sukūrė Yaohai. Būdas pasiekti naudoti kitą fermentą; T7 RNR polimerazė. Pavyzdžiui, šis unikalus fermentas atpažįsta specifines RNR sritis. šokinėjantis kūgis, skirtas padaryti daug daugiau RNR kopijų procese. Šiuo metu T7 RNR polimerazė į RNR grandinę pridės daugiau, kol bus sukurta transkripto masė arba kol liepsime jai sustoti.
Išskyrę RNR kiek įmanoma slinkite žemyn, kad pamatytumėte, kaip išvalyti, ir saugokite RNR būsimam naudojimui. Rhoadesas: Kai kurie iš tų metodų yra šiek tiek labiau kraštutiniai RNR išskyrimo atžvilgiu – ne visada tai naudotumėte, bet kartais tam tikro tipo eksperimentams to reikia. Kai mūsų RNR nėra jokių teršalų, ją galima laikyti užšaldytą. Tokiu būdu tai yra saugu ir vėliau galime jį naudoti įvairiuose eksperimentuose.
Pradinės medžiagos kokybė: įsitikinkite, kad jūsų DNR šablonas yra švarus ir ne visas sudegė. Taip pat galite papildyti šviežiai atkurtais nukleotidais ir naujai atšildytais fermentais, kad padidintumėte sėkmingo eksperimento tikimybę.
Tikslios sąlygos Visi fermentai ir jų nukleotidai geriau veikia esant tam tikrai temperatūrai ir pH jūsų kūno viduje, taip pat Yaohai's Raudona fluorescencinė mRNR. Dabar šiek tiek pakoreguokite niuansus tarp sąlygų, kol pasieksite, kur yra jūsų unikalios sąrankos raktas.
Atvirkštinė transkriptazė yra neįprastas fermentas, nes jis sukuria DNR kopiją iš RNR molekulės. Mes naudojome tiek DNR, tiek DNR šabloną (cDNR) kaip įvestį mūsų in vitro transkripto metodui RNR generuoti. Tačiau daugumoje eksperimentų mokslininkai norėtų transkribuoti DNR į RNR. Atvirkštinė transkripcija yra ta vieta, kur jos pavadinimas yra toks pat kaip mRNR poli-A pasiskirstymo testas pagamino Yaohai. Tai neįkainojamas įrankis visame moksle – nuo RNR molekulių tyrimo ląstelėse iki papildomų DNR grandžių gamybos tolesniems eksperimentams.
Realūs eksperimentai, kuriuose RNR yra vienas iš dažniausiai naudojamų molekulinių įrankių kartu su Yaohai produktu VLP vakcinos gamyba E. coli. Kiekybiniai tyrimai: šie testai gali atskleisti bet kurios konkrečios molekulės, esančios mėginyje, kiekį. Pavyzdžiui, mokslininkai gali susintetinti RNR kopijų, gautų iš tikslinio geno, esančio ląstelėje, transkripto preparatą in vitro. Diagnostika gali ištirti tas kopijas, jei jos yra. Ieškodama RNR, diagnostika gali atlikti polimerazės grandininę reakciją (PGR), kad pavyzdyje padaugintų tas kopijas. Tai leidžia mokslininkams pamatyti, kaip genai išreiškiami ląstelėse, ir netgi leidžia atlikti kai kuriuos itin didelio našumo tyrimus, tokius kaip bakterinės ar virusinės infekcijos buvimas, ir diagnozuoti genetinius sutrikimus.
In vitro Transkripto protokolas yra pirmaujantis mikrobų biologijos CDMO. Daugiausia dėmesio skyrėme mikrobų pagamintoms vakcinoms ir terapinėms medžiagoms, kurios yra tinkamos žmonių, veterinarijos ir naminių gyvūnėlių sveikatos priežiūrai. Turime pažangiausias RD platformas ir gamybos technologijas, kurios apima visą procedūrą, pradedant mikrobų padermių kūrimu ir ląstelių bankininkyste, baigiant procesų ir metodų kūrimu iki komercinės ir klinikinės gamybos, kuri užtikrina sėkmingą inovatyvių sprendimų pristatymą. Laikui bėgant sukaupėme daug žinių apie biologinį apdorojimą mikrobų pagrindu. Sėkmingai įgyvendinta daugiau nei 200 projektų, o mes padedame savo klientams laikytis tokių taisyklių kaip JAV FDA ir ES EMA. Taip pat padedame jiems naršyti Australijos TGA ir Kinijos NMPA. Mūsų profesionali patirtis ir didelė patirtis leidžia greitai reaguoti į rinkos poreikius ir teikti individualias CDMO paslaugas.
Yaohai Bio-Pharma turi patirties biologinių medžiagų, sukurtų pagal in vitro transkripto protokolą, gamyboje. Siūlome pritaikytus RD ir gamybos sprendimus, tuo pačiu užtikrindami, kad nėra jokios rizikos. Mes dalyvavome įvairiuose metoduose, pavyzdžiui, rekombinantinės subvienetinės vakcinos, peptidiniai hormonai, citokinai, augimo faktoriai, vieno domeno antikūnų fermentai, plazmidinės DNR MRNR ir daugelis kitų. Esame daugelio mikroorganizmų, įskaitant mielių tarpląstelinę ir tarpląstelinę sekreciją (išeiga iki 15g/l), taip pat bakterijų tarpląstelinio tirpaus ir inkliuzinio kūno (išeiga net 10g/l) specialistas. Taip pat sukūrėme BSL-2 fermentacijos platformą bakterinėms vakcinoms kurti. Mes orientuojamės į procesų tobulinimą, produktų išeigų didinimą ir gamybos sąnaudų mažinimą. Pasitelkę stiprią technologijų komandą galime užtikrinti greitą ir patikimą projekto pristatymą, kuris greičiau pateiks jūsų produktą į rinką.
Yaohai Bio-Pharma, 10 geriausių biologinių produktų gamintojų, specializuojasi mikrobinėje fermentacijoje. Mes pastatėme modernią įrangą su tvirtomis RD galimybėmis ir pažangia įranga. Turime penkias vaistinių medžiagų gamybos linijas, kurios atitinka GMP mikrobinės fermentacijos ir gryninimo reikalavimus. Taip pat turime dvi automatines kasečių, buteliukų ir užpildytų švirkštų užpildymo užbaigimo linijas. Galimos naudoti fermentacijos skalės svyruoja nuo in vitro transkripto protokolo iki 2000 l. Buteliuko užpildymo specifikacijos svyruoja nuo 1 ml iki 25 ml. užpildyto švirkšto ar kasetės užpildymo specifikacijos svyruoja nuo maždaug 1–3 ml. Mūsų cGMP suderinama gamykla užtikrina nuolatinį klinikinių mėginių ir komercinių prekių tiekimą. Mūsų gamykla gamina dideles molekules, kurios siunčiamos į pasaulį.
„Yaohai BioPharma“ yra 10 geriausių mikrobų CDMO, apimantis in vitro transkripto protokolą ir reguliavimo reikalus. Mes turime kokybės valdymo sistemą, kuri atitinka dabartinius GMP standartus ir pasaulinius reglamentus. Mūsų reguliavimo ekspertų komanda išmano pasaulines reguliavimo sistemas, kad paspartintų biologinį paleidimą. Užtikriname atsekamus gamybos procesus kokybiškus produktus, taip pat atitinkančius JAV FDA ir ES EMA taisykles. Australijos TGA ir Kinijos NMPA taip pat patenkinti. „Yaohai BioPharma“ sėkmingai išlaikė mūsų GMP kokybės sistemos ir gamybos įmonės Europos Sąjungos kvalifikuoto asmens (QP) auditą vietoje. Be to, atlikome pirmuosius ISO9001 kokybės vadybos sistemos, ISO14001 aplinkosaugos vadybos sistemos ir ISO45001 darbuotojų saugos ir sveikatos vadybos sistemos sertifikavimo auditus.