Labas. Ar jūs kada nors norėjote sužinoti, kaip mokslininkai gali klonuoti RNA? RNA yra ypatingas molekulė, kurią randame savo ląstelėse ir ji atlieka daug įvairių funkcijų, kad gamtų baltymus, o baltymai yra ten, kad mūsų kūnas galėtų atlikti viską tinkamai. Šioje dalimi, mes praeisime per labai rūštingą protokolą, kurį taiko tyrimo specialistai: in vitro transkripcija. Tai tiesiog reiškia, kad mokslininkai ima RNA ir gamina daugiau jos testo dujose (kurios yra maži laboratorijos indai), todėl eikime per kiekvieną žingsnį čia.
Užbaudęs savo ankstesnį įrašą, supratau, kad paskutinis gali būti buvo truputį nuobodaus - prisijunkite prie „mokslinių“ įrašų; todėl, laikantis to paties stiliaus, dabar, kai esate linkę tikrai būti treniruojamiems (sic RNA gamybos) geležinkelio: Kokių reagentų ir ko jums reikės EF?? Norint tai pasiekti, mums reikės specialių baltymų, vadinamų enzymais, panašių į Yaohai produktą Rekombinantinio Midkine gamyba . Jis katalizuoją chemines reakcijas, šios enzymai padeda jas suskirstyti. Dabar mums reikia tik mūsų DNS dalies. Ši funkcija yra DNS, kurį naudojame kaip šabloną, kad nukopijuotume mūsų RNA. Taip pat reikalingi papildomi reguliavimo sekos RNA, vadinamųjų nukleotidai. Šie nukleotidai yra panašūs į mažus statinius blokus, kurie turi būti sujungti, kad būtų sukurtas RNA. Taip pat naudojame trumpus rietinius mažu dydžiu, kad įtrauktumėme skonį į kitus tyrimus. Galiausiai mums reikia prietaiso (termociklizatoriaus), kuris užtikrina, kad reakcijos būtų tinkamo temperatūros lygio. Be to, kai kuriais eksperimentais gali reikėti keletro įrankių ir produktų.
Taigi čia dalykai skiriasi, turime vieną RNA grandinę ir dabar norime gauti daugiau jos kopijų, taip pat Sujungtinės VLP vakcinos gamyba buvo sukurtas pagal Yaohai. Būdas tai pasiekti – naudoti kitą enzymą; T7 RNA polimerazę. Šis unikalus enzymes, pavyzdžiui, pažymi konkrečias sritys viduje RNA. šalis naudojama siekiant padaryti dar daugiau RNA kopijų toliau procese. Šiame etape, T7 RNA polimerazė pridės dar daugiau prie RNA grandinės iki to momento, kai bus sukurtas didelis transkripto kiekis, arba kol mes jį užgesinsime.
Po to, kai išskirtume RNA kiek galima daugiau, judėkite toliau žemiau, kad sužinotumėte, kaip išvalyti ir saugoti RNA ateities naudojimui. Rodas: Kai kurie iš tų metodų yra truputį ekstremalsesni terminams skiriant RNA – jūs ne visada juos naudosite, bet kartais tam tikram eksperimento tipui tai būtina. Kai mūsų RNA bus laisva nuo bet kokio kontaminanto, ją galima saugoti šaltai. Taip ji yra saugi ir vėliau mes galime ją naudoti įvairiuose eksperimentuose.
Pradinių medžiagų kokybė: įsitikinkite, kad jūsų DNA šablonas yra išvalytas ir nesugriautas. Taip pat galite pridėti naujai persudarytus nukleotidus ir naujai atšalintus enzymus, kad didintumėte sėkmingo eksperimento tikimybę.
Nuostatų derinimas: Visi enzymai ir jų nukleotidai geriau veikia tam tikru temperatūros ir pH lygiu viduje jūsų kūnoje, taip pat ir Yaohai's. Raudona fluorescencinė mRNA . Dabar pakoreguokite sutrumpinimus tarp sąlygų, kol pasieksite, kas yra raktas jūsų unikaliems nustatymams.
Atvirkštinė transkriptazė yra neįprasta enzymo rūšis, nes ji sukuria DNA kopiją iš RNA molekulės. Mums generuojant RNA in vitro transkripcijos metodu naudojome tiek DNą, tiek ir DNA šabloną (cDNA) kaip įvestį. Tačiau daugelio eksperimentų metu mokslininkai norėtų transkribuoti DNA į RNA. Atvirkštinė transkripcija suteikia jai pavadinimą, kuris yra tas pats kaip mRNA poli-A skirstymo tyrimas sukurta Yaohai. Tai yra nematomas įrankis visoje mokslo srityje - nuo RNA molekulių tyrimo ląstelėse iki komplementinių DNA grandynų gamybos tolesniams eksperimentams.
Realūse eksperimentuose, kuriuose RNA yra vienas iš populiariausių molekulinio tyrimo įrankių kartu su Yaohai produktais VLP vakcinų gamyba E. coli . Kiekybiniai tyrimai: Šie testai gali atskleisti jokio konkrečiojo molekulo kiekio pavyzdžyje. Pavyzdžiui, mokslininkai gali sintezuoti in vitro transkripcijos paruošimą iš RNA kopijų, kurios yra gautos iš tikslaus gene, esančio klėtyje. Diagnostika tada gali atlikti tyrimą šioms kopijoms. Jei ieškomos RNA, diagnostika gali vykdyti polimerazinę grandinės reakciją (PCR), kad padidintų šias kopijas pavyzdžyje. Tai leidžia mokslininkams matyti, kaip genai išreiškiami klėtyse, ir net leidžia atlikti kai kuriuos labai aukštą našumą turinčius tyrimus, pvz., bakterinių ar virusinių infekcijų egzistavimo nustatymą bei geninių ligų diagnozavimą.
in vitro Transcript Protocol yra vadingiausias mikrobinių biologinių CDMO. Mes koncentruojame dėmesį į mikrobiškai gamintus vakcinus ir terapijas, kurios tinka žmonių, gyvūnų bei šeimos gyvūnų sveikatos valdymui. Turime moderniausius RD platformas ir gamybos technologijas, kurios apima visą procesą – nuo mikroorganizmų rūšių kūrimo ir ląstelių bankavimo iki proceso ir metodu kūrimo bei kliniškos ir komercinės gamybos, užtikrinančios inovacinių sprendimų sėkmingą pristatymą. Per laiką mes susirinkome plačiosios mikrobinių bioapdorojimo žinios. Sėkmingai baigta daugiau nei 200 projektų, o mes padėsiame savo klientams atitikti reguliatus, tokiais kaip JAV FDA ir ES EMA. Taip pat jiegiems padedame orientuotis Australijos TGA ir Kinijos NMPA. Mūsų profesionalus ekspertizė ir plačiai patirtis leidžia greitai reaguoti į rinkos poreikius ir teikti individualizuotus CDMO paslaugas.
Yaohai Bio-Pharma turi patirties gamyboje biologinių medžiagų, sukurtų in vitro transkripcijos protokolu. Siūlome pasirinktinus tyrimo ir vystymosi (RD) bei gamybos sprendimus, užtikrinant, kad nerizikuotume. Esame įsitraukę į įvairias modalines sritis, tokias kaip subvakuoliniai rekombinuoti vakcinos, peptidiniai hormonai, citokinai, augimo veiksnių, vieneto domenos antikūnai, enzymai, plazmidinis DNA MRNA ir daug kitų. Specializuojamės daugelyje mikroorganizmų, įskaitant grybų išorinę ir vidinę sekreciją (iki 15 g/L gręžio) bei bakterijų vidinę tirpalumą ir inkluzijų kūną (gręžio lygis gali būti iki 10 g/L). Taip pat sukūrėme BSL-2 fermentacijos platformą bakteriniams vakcinoms. Koncentruojamės į procesų tobulinimą, produkto gręžio padidinimą ir gamybos išlaidų sumažinimą. Naudojantis galinga technologijų komanda, galime užtikrinti greitą ir patikimą projektų pateikimą, kad jūsų produktas pasiektų rinką greičiau.
Yaohai Bio-Pharma, vienas iš pirmtūkstantų biologinių produktų gamintojų, specializuojasi mičelių fermentacijoje. Sukūrėme modernią įrangą su stipriomis tyrimo ir plėtros gebėjimais bei išsamią įrangą. Turime penkis vaistinių medžiagų gamybos linijas, atitinkančias GMP reikalavimus mičelių fermentacijai ir šalinimui. Taip pat turime du automatizuotos vamzdžių užpildymo linijas kartu su buteliais ir priešužpildytomis injekcijų angažūromis. Fermentacijos mastai kinta nuo in vitro Transkripcijos Protokolo iki 2000L. Butelio užpildymo specifikacijos kinta nuo 1ml iki 25ml, o priešužpildytų injekcijų angažūrų arba vamzdžių užpildymo specifikacijos yra apie 1-3ml. Mūsų cGMP atitinkanti gamybos įstaiga užtikrina klinikinių imtinių bei komercinių prekių nuolatį tiekimą. Mūsų gamykla gamina didelius molekulės dydžio produktus, kurie siunčiami visame pasaulyje.
Yaohai BioPharma yra viena iš 10 geriausių mikrobiologinių CDMO, kuri įtraukia in vitro transkripcijos protokolą bei reguliariuosius reikalavimus. Mes turime kokybės valdymo sistemą, atitinkančią dabartiniausios GMP standartų ir pasaulinių reguliavimo normų reikalavimus. Mūsų reguliariųjų ekspertų komanda gali suprasti visuotinį reguliavimo pagrindų kontekstą, kad paaukštintų biologinių gaminių išleidimo procesą. Mes užtikriname sekamą gamybos procesą, kokybiškus produktus ir laikomės JAV FDA ir ES EMA taisyklių. Taip pat mums tenka paskutinio patvirtinimo nuo Australijos TGA ir Kinijos NMPA. Yaohai BioPharma sėkmingai praeino vietinę inspekciją dėl Europos Sąjungos Kvalifikuoto Asmenybės (QP) vertinimo mūsų GMP kokybės sistemos ir gamybos įstaigos atžvilgiu. Be to, mes sėkmingai praeigome pirmąjį ISO9001 kokybės valdymo sistema, ISO14001 aplinkosaugos valdymo sistema ir ISO45001 darbo saugumo ir sveikatos valdymo sistema sertifikavimo audito.