CirRNR paruošimui reikalinga linijinė RNR kaip pirmtako medžiaga (RNR pirmtakas) ciklizacijai, kur RNR pirmtakas paprastai paruošiamas naudojant tiesinę plazmidinę DNR kaip transkripcijos šabloną ir transkribuojamas in vitro naudojant T7 RNR polimerazę.
Aukštos kokybės plazmidinė DNR yra būtina transkripcijai in vitro (IVT). Remdamasi subrendusia plazmidės paruošimo paslaugų platforma, Yaohai Bio-Pharma gali teikti didelio grynumo ir standartinę linijinės plazmidės DNR (pDNR) paruošimo paslaugą, kad užtikrintų IVT produktų vientisumą.
Paslaugų informacija
| Procesas | Pasirenkama paslauga | Informacija apie paslaugą | Pristatymo laikotarpis (darbo diena) |
| Žiedinės plazmidės paruošimas | Genų sintezė | Genų sintezė (trečioji šalis) | 7-10 |
| Plazmidės stiprinimas | Plazmidės stiprinimas | 2 |
| Plazmidės ekstrahavimas |
| Linearizuotos plazmidės paruošimas | Plazmidžių tiesinimas ir gryninimas | Plazmidžių linijavimas | 1 |
| Linijinis DNR valymas |
| Plazmidinės DNR kokybės kontrolė | Koncentracijos grynumas | Ultravioletinė (UV) spektrofotometrija | 1-2 |
| Plazmidės konformacija | Agarozės gelio elektroforezė (AGE) |
| Kapiliarinė elektroforezė (CE) – neprivaloma |
| Atpažinti plazmidę | Restrikcijos fermento identifikavimas/ AGE |
Mūsų funkcijos
Lankstus linearizacijos metodų pasirinkimas
- Aukštas atkūrimo rodiklis
DNR ekstrahavimo ir gryninimo metodų optimizavimas, kad būtų pasiektas didelis atkūrimo rodiklis.
Griežti proceso kontrolės standartai, kurių plazmidžių mėginių superspiralinės konformacijos greitis tyrimams viršija 80%.
- Brandžios platformos procesas
Aukšto lygio ir didelio efektyvumo plazmidžių paruošimo ir kokybės kontrolės paslaugos, atitinkančios eksperimentinius poreikius.
Atvejo analizė
Pavyzdžiui, Yaohai Bio-Pharma produktas mCherry circRNA, transkripcijos šablono plazmidžių mėginių superspiralinis santykis (tyrimo laipsnis) yra didesnis nei 70%, o tiesiškumo lygis yra beveik 100%.
mCherry cirRNR paruošiama naudojant tiesinę plazmidę kaip šabloną ir transfekuota į 293T ląsteles. Aukštas fluorescencijos ekspresijos lygis (raudonoji fluorescencija) nustatomas po 24 valandų po transfekcijos, kuris sustiprės po 48 valandų ir vis dar gali būti aptiktas 7 ir 14 dieną po transfekcijos.
mCherry baltymas yra stabiliai ir efektyviai ekspresuojamas, o transkripcijos šablono grynumas gali atitikti aukštos kokybės cirRNR vaisto produkto (DP) reikalavimus.
mCherry cirkRNR ekspresijos patvirtinimas in vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
