Palyginti su dviejų pakopų fermentiniu ribojimu, vieno žingsnio bendro transkripcijos ribojimo metodas gali žymiai sumažinti proceso eigą. Šis metodas yra orientuotas į rezultatą ir apima dangtelio analogų pridėjimą prie in vitro transkripcijos (IVT) reakcijos. Dangtelio analogai gali būti įvesti transkripcijos pradžioje, o mRNR su dangtelio struktūra gali būti gaunama baigus transkripciją. Dabartiniai trečiosios kartos dangtelio analogai gali išvengti atvirkštinio ribojimo ir tiesiogiai pridėti Cap 1 struktūrą į transkripcijos produktą.
Atsižvelgiant į mRNR imunogeniškumą in vivo ir transliacijos efektyvumą, IVT procese dažnai naudojami tam tikrų tipų modifikuoti NTP, o įprasti modifikuoti nukleotidai yra pseudouridinas (Ψ), N1-metil-pseudouridinas (N1Ψ) ir 5-metilcitozinas (5 mC). .
Paveikslas: mRNR bendros transkripcijos ir ribojimo reakcijos diagrama
Informacija apie paslaugą
tarnyba | Informacija apie paslaugą | Pristatymo laikotarpis (darbo diena) |
Bendras transkripcijos apribojimas | In vitro transkripcijos atsakas (Clean Cap analogas) | 1-2 |
| Nukleotidų modifikacijos (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| DNR šablono pašalinimas (DNazė I) |
IVT sąlygų optimizavimas – neprivaloma | Reakcijos komponentų projektavimas ir optimizavimas | 3-7 |
Mūsų funkcijos
- Įvairios nukleotidų modifikavimo strategijos
Kelios pasirenkamos nukleotidų modifikavimo strategijos gali pagerinti baltymų ekspresiją.
- Optimizuota reakcijų sistema
Pasiekite aukštą transkripcijos santykį ir aukštą ribojimo efektyvumą.
- Stabilus uždengimo procesas
Pasiekite daugiau nei 95 % ribą.
Efektyviai užkirskite kelią mRNR degradacijai griežtai kontroliuodami RNazę eksperimentinėje aplinkoje ir eksploatacinėse medžiagose.
Atvejo analizė
„Yaohai Bio-Pharma“ sukūrė brandžią bendro transkripcijos ribojimo proceso platformą, naudodama švarius dangtelio analogus, kad tiesiogiai pridėtų Cap1 struktūrą, išvengiant atvirkštinio ribojimo. Po standartizuoto pirminio mėginio apdorojimo ir kapiliarinės elektroforezės (CE) aptikimo, sustiprinto žalio fluorescencinio baltymo (eGFP) mRNR ribojimo greitis gali siekti daugiau nei 95%.
eGFP mRNR ribojimo efektyvumas daugiau nei 95 %
eGFP mRNR ir mCherry mRNR, paruoštos naudojant bendro transkripcijos dangtelį, atitinkamai transfekuojamos į 293T ląsteles, o po 48 valandų stebimas stiprus fluorescencinis signalas, o tai rodo, kad mRNR yra efektyviai ekspresuojama 293T ląstelėse.
eGFP mRNR ir mCherry mRNR ekspresija 293T ląstelėje
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
