Pasirinktinė saRNR sintezė
Savaime amplifikuojanti mRNR (saRNR), dar žinoma kaip replikono RNR, koduoja in vitro transkripcijos (IVT) mRNR sekas ir viruso replikazės genus, gautus iš alfa viruso ar flavivirusų. Viruso replikazės genai leidžia savaime amplifikuoti mRNR, todėl padidėja baltymų ekspresija ir mažiausia reikalinga RNR dozė, palyginti su neamplifikuojančiomis mRNR. Kitas aspektas yra tai, kad saRNR yra gana didelė molekulė (daugiau nei 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma sukūrė mRNR sintezės technologijų rinkinį, skirtą neamplifikuojančiai mRNR ir savaime amplifikuojančiai mRNR (1000 nt ~ 14000 nt), pvz., sekos projektavimą ir optimizavimą, IVT, gryninimą, liofilizavimą ir lipidų nanodalelių (LNP) kapsuliavimą. . Visi gaminiai išleidžiami pagal griežtus kokybės kontrolės standartus.
1 pav. IVT mRNR struktūrinės ypatybės: įprastinė, žiedinė ir savaime amplifikuojanti mRNR.
Savaime amplifikuojančios mRNR sekos ypatybės
Savaime amplifikuojančią RNR sudaro keturi nestruktūriniai baltymai (žymimi kaip nsP1, nsP2, nsP3 ir nsP4), kurie yra gauti iš alfa virusų, Venesuelos arklių encefalito viruso (VEEV). Tarp jų nsP1 pasižymi dvigubu fermentiniu aktyvumu, būtent GTazė ir N7MTazė, o nsP2 turi RTPazės aktyvumą, kuris yra esminis IVT mRNR ribojimas, kad būtų sukurta Cap 0 struktūra. Be to, nsP2 tarnauja kaip proteazė ir helikazė, palengvinanti sudėtingą viso nsP komplekso apdorojimą. Tiksli nsP3 funkcija lieka sunkiai suprantama, tačiau ji sąveikauja su įvairiais šeimininko ląstelės baltymais, taip prisidėdama prie šeimininko sukelto antivirusinio atsako susilpnėjimo.
Alfaviruso subgenominio promotoriaus (SGP) sritis yra prieš dominantį geną (GOI). SGP elementas palengvina GOI transkripcijos inicijavimą, apeidamas viruso nsP baltymus koduojančios sekos nuskaitymą.
2 pav. Yaohai Bio-Pharma RNASci platformos eGFP saRNR sintezė ir ląstelių tyrimai.
Individualūs saRNR sprendimai
SaRNR sintezės protokolas yra panašus į mRNR: Individualizuota mRNR sintezė
- Sekos dizainas
- Plazmidinio šablono paruošimas
- in vitro transkripcija (IVT)
- mRNR fermentinis ribojimas
- mRNR bendro transkripcijos ribojimas
- mRNR valymas
- mRNR liofilizavimas
- LNP Inkapsuliacija
- Analizė ir testavimas
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
