Žiedinė mRNR (cirRNR) buvo plačiai naudojama tiriant genų ar baltymų funkcijas. Tuo tarpu jis yra populiarus kuriant profilaktinius ir gydomuosius biologinius preparatus, panašius į mRNR.
„Yaohai Bio-Pharma“ sukūrė cirRNR sintezės technologijų rinkinį, kad pateiktų aukštos kokybės RNR, pvz., sekos projektavimą ir optimizavimą, in vitro transkripciją (IVT), cirkuliaciją / ciklizavimą, gryninimą ir lipidų nanodalelių (LNP) kapsuliavimą. Visi produktai išleidžiami pagal griežtus kokybės kontrolės (QC) standartus.
Palyginti su linijine mRNR, žiedinė RNR (cirRNR) yra stabilesnės struktūros ir yra pagrindinis dabartinių nukleino rūgščių vaistų tyrimų taškas. Jis naudojamas įvairiose srityse, nesvarbu, ar tai koduojanti cirRNR, ar nekoduojanti cirRNR, įskaitant profilaktines vakcinas nuo infekcinių ligų, terapines onkologines vakcinas, terapinius onkologinius vaistus, pakaitinę baltymų terapiją, regeneracinę mediciną, ląstelių ir genų terapiją (CGT). , molekulinės kempinės vaidmuo ir RNR aptameris.
Procesas | Pasirenkama paslauga | Informacija apie paslaugą | Pristatymo laikotarpis (dieną) |
cirRNR sekos projektavimas ir optimizavimas | Kodavimo sekų projektavimas ir optimizavimas | CDS kodono optimizavimas | 1 |
Nekoduojamų sekų projektavimas ir optimizavimas | Intronų ir egzonų seka, homologinės rankos ir tarpiklio projektavimas ir optimizavimas | 1-2 | |
Apvalios plazmidės paruošimas | Genų sintezė | Genų sintezė (trečioji šalis) | 7-10 |
Plazmidžių amplifikacija | Plazmidžių amplifikacija | 2 | |
Plazmidžių ekstrahavimas | |||
Linearizuotos plazmidės preparatas | Plazmidžių tiesinimas ir gryninimas | Plazmidžių linearizacija | 1 |
Linijinis DNR valymas | |||
In vitro transkripcija ir ciklizacija | In vitro transkripcija ir ciklizacija | In vitro transkripcijos ir ciklizacijos reakcijos | 1-2 |
Rnazės R virškinimas | |||
Optimizavimas – neprivaloma | Reakcijos sudėtis, laiko optimizavimas | 2-5 | |
cirRNR valymas | Įprastas valymo metodas | Ličio chlorido nusodinimas | 1 |
Magnetinių karoliukų valymas | 1 | ||
Labai grynas cirRNR valymas | Parengiamoji didelio efektyvumo skysčių chromatografija (HPLC) | 1-2 | |
Buferio mainai | Ultrafiltracija | 1 | |
cirRNR liofilizacija | Mėginio užpildymas | Pildymas | 2-3 |
Liofilizavimas | Išankstinis užšaldymas | ||
Pirminis džiovinimas (sublimacija) | |||
Antrinis džiovinimas (desorbcija) | |||
cirRNR-LNP kapsuliavimas | LNP Inkapsuliacija | Medžiagų ir skysčių paruošimas | 2 |
Mikrofluidinių prietaisų maišymas | |||
Buferio mainai | Tangentinio srauto filtravimas | 1 | |
Sterilizuokite | Filtravimas | ||
Plazmidinės DNR kokybės kontrolė | Koncentracija/grynumas | Ultravioletinė (UV) spektrofotometrija | 1-2 |
Plazmidės konformacija | Agarozės gelio elektroforezė (AGE) | ||
Kapiliarinė elektroforezė (CE) – neprivaloma | |||
Atpažinti plazmidę | Restrikcijos fermento identifikavimas / AGE | ||
CirRNR kokybės kontrolė | Koncentracija/grynumas | Ultravioletinė (UV) spektrofotometrija | - |
Tyrumas | Agarozės gelio elektroforezė (AGE) / E-Gel | 0.5 | |
HPLC neprivaloma | 1 | ||
CirRNR-LNP kokybės kontrolė | Inkapsuliavimo efektyvumas | RiboGreen metodas | 1 |
Dalelių dydis | Dinaminė šviesos sklaida (DLS) | 1 | |
Polidispersiškumo indeksas | Dinaminė šviesos sklaida (DLS) | 1 | |
Zeta potencialas | Dinaminė šviesos sklaida (DLS) | 1 | |
Ląstelių potencijos tyrimas | Ląstelių transfekcija | Ląstelių padengimas, ląstelių transfekcija | 4 |
Tikslinių baltymų aptikimas | Fluorescencinis stebėjimas, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Į 293T ląsteles transfekavome sustiprintą žalią fluorescencinį baltymo cirRNR (eGFP cirRNR), mCherry cirRNR, luciferazės cirRNR ir aptikome tikslinį baltymą per fluorescencinį, liuminescencinį arba spalvos signalą, Western blot (WB), su fermentu susietą imunosorbentinį tyrimą (ELISA).
„Yaohai Bio-Pharma“ cirRNR mėginių ląsteliniai stiprumo tyrimai