Produktai, gauti taikant ciklizaciją in vitro ir praturtinant RNazę R, turi būti toliau pašalinami iš in vitro transkripcijos (IVT), įskaitant nesuvartotus substratus ciklizacijos reakcijoje, reakcijos šalutinius produktus ir įtrūkusią RNR.
„Yaohai Bio-Pharma“ turi subrendusių LiCl nusodinimo, magnetinių granulių valymo, savarankiškai sukurtų valymo ir kitų įvairių valymo sprendimų, skirtų veiksmingai pašalinti įvairias priemaišas ir paruošti labai gryną cirRNR.
Valymo tirpalas nedideliems cirRNR kiekiams, skirtas ląstelių transfekcijai ir kaip eksperimentų su gyvūnais dalis.
Valymo tirpalas nedideliems cirRNR kiekiams, skirtas ląstelių transfekcijai ir kaip eksperimentų su gyvūnais dalis.
Aukštesnės kokybės taikymo scenarijai;
Stabilus ir keičiamo dydžio valymo procesas, atitinkantis GMP gamybos reikalavimus.
Procesas | Pasirenkama paslauga | Informacija apie paslaugą | Pristatymo laikotarpis (diena) | Pristatomos |
cirRNR gryninimas | Įprastas valymo tirpalas | Ličio chlorido nusodinimas | 1 | cirRNR vaistinė medžiaga |
Magnetinių karoliukų valymas | ||||
Labai grynas cirRNR valymas | Parengiamoji didelio efektyvumo skysčių chromatografija (HPLC) | 1-2 | ||
Buferio keitimas | Ultrafiltracija | 1 | ||
cirkRNR kokybės kontrolė | Koncentruoti / išvalyti | Ultravioletinė (UV) spektrofotometrija | 0.5 | Testo ataskaita |
Tyrumas | Agarozės gelio elektroforezė (AGE) / E-gelis | |||
HPLC neprivaloma | 1 |
Galima pasiekti taikymo scenarijus.
cirRNR, kurios grynumas didesnis nei 90 %;
Griežtai kontroliuojant RNazes eksperimentinėje aplinkoje ir eksploatacinėse medžiagose, veiksmingai užkertamas kelias RNR skilimui.
Yaohai Bio-Pharma sukūrė brandų cirRNR valymo tirpalą, kuris gali veiksmingai pašalinti įvairias su procesu susijusias priemaišas.
Apvalūs RNR produktai, išgryninti įprastu tirpalu, vis dar akivaizdžiai sumaišomi su nikuota RNR ir intronais.
Po Yaohai Bio-Pharma sukurto gryninimo tirpalo galima sėkmingai pašalinti įvairias linijines RNR priemaišas, tokias kaip įtrūkusi RNR ir intronai.
cirRNR ekspresijos patvirtinimas
Naudojant įprastą liposomą, išgryninta eGFP cirRNR yra transfekuojama į 293T ląsteles, o fluorescencijos signalas stebimas po 24 valandų ir toliau stiprinamas po 48 valandų. Fluorescencinis signalas vis dar gali būti aptiktas 7-ą ir 14-ą dieną po transfekcijos.