MRNR stiprumo tyrimo reikšmė
Sparčiai tobulėjant mRNR vakcinoms ir terapinėms medžiagoms, reikalinga specifinė analizės metodų grupė, skirta patikrinti stiprumą (apibrėžiant jų biologinį aktyvumą), apimantį mRNR transliacijos efektyvumą. Šie metodai paprastai yra pagrįsti ląstelių transfekcija ir tikslinio baltymo funkciniais tyrimais.
Yaohai Bio-Pharma siūlo ląstelinius mRNR vaistinių medžiagų ar LNP produktų stiprumo tyrimus, įskaitant ląstelių transfekciją (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 ląstelės ir kt.) ir ELISA arba Western Blotting (WB) tyrimus.
Reguliavimo reikalavimai stiprumo tyrimams
Pagal PSO reguliavimo nuostatas: „Kiekvienos galutinės vakcinos partijos stiprumas turėtų būti nustatytas naudojant tinkamai kiekybinį ir patvirtintą funkcinį metodą (-us). Galimi in vitro stiprumo tyrimai gali apimti ląstelių transfekcijos sistemas arba tyrimus be ląstelių. Ir USP rekomendavo „ląstelių tyrimą“, kad patikrintų mRNR stiprumą, ty tikslinio baltymo ekspresiją.
Procedūra
1 veiksmas. Ląstelinė transfekcija su mRNR arba mRNR-LNP
Ląstelės kultivuojamos ir transfekuojamos mRNR arba mRNR-LNP. Išsamiau, mRNR yra transfekuota po to, kai sumaišoma su transfekcijos reagentu, o mRNR-LNP yra tiesiogiai transfekuota į ląsteles. Po 24–48 valandų nuskaidrinkite supernatantą, kuriame yra išreikštas baltymas, centrifuguodami.
2 veiksmas. Tikslinio baltymo funkciniai tyrimai
Atlikite ELISA arba WB tyrimus, kad įvertintumėte tikslinių baltymų funkcinį surišimą.
Atvejo analizė
Ląstelėmis pagrįsti mRNR mėginių stiprumo tyrimai
Yaohai-BioPharma sukūrė mRNR ląstelinio stiprumo tyrimo metodą, apimantį ląstelių kultūrą, ląstelių transfekciją ir baltymų funkcinius tyrimus. Mes transfekavome eGFP mRNR, mCherry mRNR, luciferazės mRNR, smaigalio baltymo mRNR į 293T ląsteles ir aptikome tikslinį baltymą per fluorescenciją, liuminescencinį arba spalvotą signalą, WB, ELISA.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
