Pagal centrinį dogmą, pranešimo RNA (mRNA) yra tiltas genetiniam medžiagai perduoti iš DNA į baltymus.
mRNA atlieka biologinį vaidmenį koduojant baltymus organizme, o eukariotinių organizmų suvirsčioji mRNA sudaryta iš penkių dalių: 5' Kapas (kapo struktūra), 5' UTR (nekoduojamas regionas), ORF (atvirasis skaitymo langas), 3' UTR ir 3' polyA uodega (poliadeno uodega).
Paslaugų detalės
| Procesas |
Neprivalomas Paslauga |
Paslaugų detalės |
Pristatymo laikotarpis (diena) |
| mRNA Sekos Dizainas ir Optimalizavimas |
Kodujančių seku dizainas ir optimalizavimas |
CDS sekansų lyginimas
CDS kodono optimizavimas
|
1 |
| Nenuklizinio sekų projektavimas ir optimizavimas |
5' UTR sekos dizainas ir optimizavimas
3' UTR sekos dizainas ir optimizavimas
polyA sekos dizainas ir optimizavimas
|
1-2 |
Pasirinkimo galimybės
| 5’ UTR\/3’ UTR |
- Gamtos UTR seka
- Mutanto\/Inžinieringa UTR seka
|
| 3' PolyA uodega |
- 100A ~120A uodega (rekomenduojama)
- Segmentuota polyA uodega
- Kitas priedas
|
Bendros strategijos mRNA sekos dizainui
| mRNA komponentai |
Biologinės funkcijos |
Optimizavimo strategijos |
| 5' kapas |
Apsaugoti mRNA nuo degradacijos dėl exonukleazų ir dirbti kartu su polyA uodega 3' galą, polyA jungties baltymu ir vertimo pradžios faktoriaus baltymu, kad pradėtų baltymo vertimą. |
Natūralus Cap1 struktūra vengia modelio atpažinimo receptorius ir taip sumažina natūralią imuninę atsakomybę, kuri gali būti pasiekiama vienu etapu bendro transkripcinio apdorojimo arba dviejų etapų enzymatiniu apdorojimu [žr. mRNA enzymatinį apdorojimą ir bendro transkripcinio apdorojimo išsamiau]. |
| 5' UTR |
5' UTR gali būti atpažintas ribosomomis, reguliuoti mRNA vertimą ir paveikti mRNA stabilumą. |
Turėti Kozak sekcijas be labai stabilios antrosios sandaros. Gamtinių UTR regionų iš aukštais lygiais išreikštų genų, pavyzdžiui, α-globino ir β-globino, rekomenduojama naudoti in vitro transkripcijai (IVT) mRNA. |
| CDS |
Regionai koduojantys baltymus ir kodavimo sekos antigenums, antikūnams ar kitoms funkcionalioms baltymų formoms. |
Kodonų optimizavimas padidina vertimą, atsižvelgiant į tai, kad kai kurie neoptimalūs kodonai gali turėti vaidmenį baltymo suklaidymo procese. |
| 3' UTR |
Reguliuoja mRNA vertimą ir stabilumą. |
Gamtinių UTR regionų iš aukštais lygiais išreikštų genų, pavyzdžiui, α-globino ir β-globino, rekomenduojama naudoti IVT mRNA. |
| 3' polyA uostas |
Reguliuoja baltymo išreikšmę ir apsaugo kapo struktūrą nuo degeneracijos. |
Reikalingas tinkamas ilgis (100-150 bp); poliA uosto kodavimas transkripcijos šabloninėje plazmidoje užtikrina tikslesnį poliA uosto ilgį. |
Mūsų ypatybės
- Įvairių UTR šaltinių pasirinkimas
Kelišališki aukštai išreikšti natūralūs ir modifikuoti UTR bibliotekos; sužinojusi UTR modifikavimo strategija;
- Inovacinis CDS optimizavimo komandos
Suderinama su profesionaliai AI algoritmo komanda, kad baigtų kodonų optimizavimą.
- Tolygus polyA uodega skirstymas
Pridedamos polyA sekos pagal DNA šablonus, kad tiksliau kontroliuotų bRNA ilgį.
- Įvairios optimizavimo derinys
Pasiekti efektyvų bRNA išreikšimą su žemas imunogenybe.
Praktinis pavyzdys
Dviramučio bRNA seka dizainas: mCherry-eGFP bRNA
Yaohai Bio-Pharma bRNA paslaugos toliau yra atnaujinamos, sukurdamos ir optimizuojamos dviejų ramsčių geno seką, kurios siekia dviejų genų bendro išreikšimo.
Naudojant konvencinį transfekcijos reagentą, dvigubas geno tandemu seka mCherry-eGFP mRNA transfekuojama į 293T ląstelę, ir po 48 valandų yra aptikti du fluorescencinio signalo mCherry (raudona) ir stiprintoji žali fluorescencinė baltymas (eGFP) kartu su tuo pačiu momentiniu išraiškos metu, o sudėtinis grafikas yra pažymimas geltonai.
MCherry-eGFP mRNA išraiška 293T ląseles
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
