5'-galio šapinimas yra būtina mRNA modifikacija. mRNA su šapiniais struktūrų, ypač Cap1 struktūrų, padeda mRNA išvengti gimtųjų imuninių atsakymų organizme, kad būtų galima veiksmingai atlikti baltymų sintezę.
Enzyminis šapinimas (dviejų etapų metodas) yra tradicinis mRNA šapinimo būdas, panašus į šapinimo procesą eukariotiniuose organizmuose. Serijos enzimų veikimo metu 7-metilguaninas (m7G) jungiamas su mRNA 5'-galioju per 5'-5' trifosfato ryšį ir undergo metilavimo modifikacijai, formuojant šapinio struktūrą Cap 1 (m7GpppN).
Natūralaus šapinio struktūros formavimo diagrama
Enzyminio šapinimo reakcijos srautas yra toks:
Linijinė plazmidinė DNA naudojama kaip šablonas in vitro transkripcijai (IVT) T7 polimerazės prisistatymu, ir po vienožygio purifikacijos naudojant vakcinios capping enzymą ir 2'-O-metiltransferazę formuojasi mRNA su 5' galos kapavimo struktūra.
Paslaugų detalės
Neprivalomas Paslauga |
Paslaugų detalės |
Pristatymo laikotarpis (diena) |
mRNA enzymine korojimo procedūra |
Enzyminis kapavimo reakcija |
1 |
Kapavimo reakcijos optimizavimas - neprivalomas |
Reakcijos komponentų projektavimas ir optimizavimas |
3~7 |
Mūsų ypatybės
- Kapavimo reakcijos komponentų dizainas ir optimizavimas
Kapavimo reakcijos komponentas yra optimizuotas, ir mRNA transkripto gamyba didelėja.
- In vitro išraiškos patvirtinimas
Ribotytoji mRNA perkaupiama į 293T ląstelę, o tikrojo proteino išraiškos galima nustatyti.
Per suderinamą RNaze kontrolę eksperimentiniame aplinkoje ir naudojamuose prietaisaruose efektyviai prevencijuojama mRNA degeneracija.
Praktinis pavyzdys
Yaohai Bio-Pharma's mRNA platforma sukūrė puikų capping reakcijos procesą.
Dėl eGFP mRNA, ribotytojo prekybojo produkto, pasiekiamas aukštas lygis eGFP fluorescencijos signalo (žalioji fluorescencija), kurį galima stebėti po 24 valandų nuo 293T ląstelių perkavimo, o jis aptinkamas Western Blot (WB) metodu, rodomas, kad tikslusis proteinas – stiprintasis žaliasis fluorescencinis proteinas (eGFP) gali būti efektyviai išreikštas in vitro.
Enzymatic Capped eGFP mRNA išraiška 293T ląstelėse
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
