Palyginti su dviejų etapų enzymine apdengimo metode, vieno etapo bendroji transkripcija su apdengimu gali esminiu būdu supaprastinti procesą. Šis metodas yra tikslaujantis rezultatui ir apima kapo analogų pridėjimą in vitro transkripcijos (IVT) reakcijai. Kapo analogai gali būti pridėti jau transkripcijos pradžioje, o transkripcijos baigiant gaunamas mRNAs su kapo struktūra. Dabartiniai trečiosios kartos kapo analogai gali išvengti atvirkštinio apdengimo ir tiesiogiai pridėti Cap 1 struktūrą transkripcijos produktui.
Atsižvelgiant į mRNA in vivo imunogeniškumą ir vertimo efektyvumą, IVT procesas dažnai naudoja tam tikrus modifikuotus NTPs, o paprastai naudojami modifikuoti nukleotidai yra pseudourydina (Ψ), N1-metil-pseudouridina (N1Ψ) ir 5-metilcitozinas (5mC).
Vaizdas: mRNA ko-transkripcinio ir karpavimo reakcijos diagrama
Paslaugų detalės
Paslauga |
Paslaugų detalės |
Pristatymo Laikotarpis (darbo diena) |
Ko-transkripcinis karpavimas |
In vitro transkripcinė atsakomybė (Clean Cap analogas) |
1-2 |
| Nukleotidų modifikacijos (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| DNA šablono pašalinimas (DNase I) |
IVT sąlygų optimizavimas - pasirinktinai |
Reakcijos komponentų projektavimas ir optimizavimas |
3-7 |
Mūsų ypatybės
- Diversifikuotos nucleotido modifikavimo strategijos
Keli prieinami nukleotido modifikavimo būdai gali pagerinti baltymų išsivystymą.
- Optimizuotas reakcijos sistemą
Pasiekti aukštą transkripcijos santykį ir aukštą apverčiamumo efektyvumą.
- Stabilus apverčiamumo procesas
Pasiekti apverčiamumo rodiklį daugiau nei 95%.
Efektyviai preventai MRNA degeneraciją, kontroliuodami RNazę eksperimentiniame aplinkoje ir naudojamoje medžiagoje.
Praktinis pavyzdys
Yaohai Bio-Pharma sukūrė pažangią bendrąją transkripciją su apverčiamuoju procesu platformą, naudojant švarius kapo analogus, kad tiesiogiai pridėtų Cap1 struktūrą, vengiant atvirkštinio apverčiamumo. Po standartizuoto imties preliminariojo apdorojimo ir kapilario elektroforezės (CE) aptikimo, stipriojo žalios fluorescencinio proteino (eGFP) MRNA apverčiamumo rodiklis gali pasiekti daugiau nei 95%.
eGFP MRNA apverčiamumo efektyvumas daugiau nei 95%
EGFP mRNA ir mCherry mRNA, pagaminti naudojant koplankiojo tipo capping, yra transfonuojami į 293T ląstelę atitinkamai, ir po 48 valandų matomas garsusis fluorescencijos signalas, kas rodo, kad mRNA efektyviai išsiskleidžia 293T ląseles.
EGFP mRNA ir mCherry mRNA išraiška 293T ląsele
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
