Kalbant apie masinį mRNA gamybos procesą, in vitro transkripcija (IVT) yra efektyvesnis ir sujungesnis metodas. IVT reakcijoje kaip šabloną naudojamas linearižuotas plazmidinis DNA, kuris turėtų T7 promotorių, o mRNA sintetizuoja naudojant nukleozidinius trifosfatus (NTP) kaip substratus T7 RNA polimerazės prisistatymu.
Nukleotido modifikacija yra pertrauka mokslinių tyrimų dėl mRNA, kai nekeistos mRNA molekulės yra atpažįstamos kaip intraceluliniai RNA jutikliai, kad aktyvuotų giminamąją imunologiją. Atsižvelgiant į mRNA gyvojo organizmo imunogenicumą ir perdavimo efektyvumą, IVT procese dažniausiai naudojami tam tikri keisti NTP, o paprastai vartojami keisti nukleotidai yra pseudourydilas (Ψ), N1-metilpseudourydilas (N1Ψ) ir 5-metilcitozinas (5mC).
In Vitro transkripcijos procesas mRNA
In vitro transkripcijos (IVT) reakcijos diagrama
Paslaugų detalės
Neprivalomas Paslauga |
Paslaugų detalės |
Pristatymo Laikotarpis (darbo diena) |
In vitro transkripcija (IVT) |
IVT, In vitro transkripcija |
1 |
| Nukleotido modifikacijos (Ψ/N1Ψ/5mC ir kt.) |
| DNA šablono pašalinimas (DNase I) |
IVT sąlygų optimizavimas - pasirinktinai |
IVT reakcijos komponentų projektavimas ir optimizavimas |
2-5 |
Mūsų ypatybės
- Diversifikuotos nucleotido modifikavimo strategijos
Gerinti mRNA stabilumą ir baltymų išraišką vivo.
- Suderintas testavimo projektavimas ir optimizavimas
galima pasiekti mRNA fragmentų paruošimą iki 10kb.
Optimizuojant IVT reakcijos sąlygas, transkripcijos tempas gali būti iki 1:200.
Griežta RNaze kontrolė per eksperimentinę aplinką ir naudojamuosius prietaisus efektyviai gali preventai mRNA degeneraciją.
Praktinis pavyzdys
Dabartinis IVT reakcijos sistemą yra apytiksliai optimizuota sintetiniams sistemoms ilgio apie 100 nt, ne visiems ilgiems mRNAs. Kartu ilgesnis mRNA sekvencija, tuo sudėtingesnė transkripcija ir tuo didesnis jos degradacijos rizikos.
Norint parengti individualizuotus mRNA sekas ilgio apie 10 kb, Yaohai Bio-Pharma sėkmingai paruošė aukštos kokybės imtis su aukstu transkripcijos santykiu 1:135 ir gavo 135 μg pradžios palyginimo mRNA produktų po to, kai 1 μg linijinio plazmino buvo transkribuota in vitro per griežtą eksperimentinių sąlygų planavimą, nuolatinius reakcijos sąlygų optimizavimus ir RNase griežtą kontrolę.
mRNA identifikacija (agarinio gelelio elektroforezė)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
