Dėl RNA prekursorių partijos paruošimo dažnai naudojama in vitro transkripcija (IVT). IVT reakcijoje yra naudojamas tiesinis plazmidinis DNA su T7 promotoriumi kaip šablonas ir sintezuojamas RNA prekursorius naudojant nukleozidinius trifosfatus (NTPs) kaip substratą T7 RNA polimerazoje.
In vitro ciklizacijos metoduose yra chemine ligačija, enzymine ligačija ir permutacinis intron-exon (PIE) metodas. Cheminė ligačija ir enzymine ligačija tinka trumpesniems RNA fragmentams. Kai fragmentas didesnis nei 100 nt, ciklizacijos tempas gali gana sumažėti. Priešingai, nuklezoidžių metodas, pagrįstas PIE sistema, gali ciklinti sekas ilgesnių nei 8 kb.
Po guanidino trifosfato (GTP) katalizacijos, PIE struktūra pergyvena ciklizaciją išorinių intronų sekų. Su deramiausiu būdu padidinti ciklizacijos greitį, Yaohai Bio-Pharma gali pasiekti iki 4 kb sekvencijų ciklizaciją, su daugiau nei 80% ciklizacijos efektyvumu.
RNA ciklizacijos reakcija in vitro vyksta taip:
RNA prekursorius sintetizuojamas in vitro transkripcija, o PIE komponentas baigia savęs splicingą GTP katalizacijos pagalba, kad sukurtų circRNA.
Paslaugų detalės
| Procesas |
Paslaugų detalės |
Pristatymo Laikotarpis (darbo diena) |
| In vitro transkripcija ir cirkuliacija |
Reakcijos sistemos patvirtinimas |
1-2 |
| In vitro transkripcijos ir ciklinimo reakcijos |
| RNase R traukinimas |
| Reakcijos optimizavimas |
Reakcijos sudėtis, laiko optimizavimas |
2-5 |
Mūsų ypatybės
- Suderintas testavimo projektavimas ir optimizavimas
Galima pasiekti iki 4 kb RNA ciklizaciją.
- Aukšta ciklizacijos efektyvumas
Racionalus sekansų optimizavimo strategija leidžia pasiekti daugiau nei 80% ciklizacijos tempą.
Per griežtą RNazės kontrolę eksperimentinėje aplinkoje ir naudojamuose prietaisams, efektyviai prevencijuojama RNA degradacija.
Praktinis pavyzdys
CircRNA in vitro ciklizavimas ir boguotė
Remiantis PIE sistema, Yaohai Bio-Pharma optimizavo circRNA seką, kurios ciklizacijos tempas siekia daugiau nei 80% pagal agarinio gelelio elektroforezės (AGE) metodus. Naudojant RNazę R, kad būtų boguojama circRNA, E-gelio elektroforezės rezultatai rodo, kad linijinis RNA prekursorius yra suvartotas, o po tolesnio šalinimo, dauguma sukauptų circRNA gali būti pašalinta. Šalinimo sprendinys buvo kurtas patys Yaohai Bio-Pharma.
CircRNA in vitro ciklizavimas ir boguotė
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
