Kalbant apie RNR pirmtakų paketinį paruošimą, dažniausiai naudojamas metodas yra in vitro transkripcija (IVT). IVT reakcija naudoja tiesinę plazmidinę DNR, turinčią T7 promotorių kaip šabloną, ir sintezuoja RNR pirmtaką su nukleozidų trifosfatais (NTP) kaip substratą, dalyvaujant T7 RNR polimerazei.
In vitro ciklizacijos metodai apima cheminį ligavimą, fermentinį ligavimą ir permutuoto intron-egono (PIE) metodą. Cheminis ir fermentinis ligavimas tinka trumpesnių RNR ciklizavimui. Kai fragmentas yra didesnis nei 100 nt, ciklizacijos greitis labai sumažės. Priešingai, nukleazės metodas, pagrįstas PIE sistema, gali pasiekti 8 kb sekų ciklizaciją.
Katalizuojant guanozino trifosfatą (GTP), PIE struktūroje vyksta papildomų intronų sekos. Kartu su pagrįsta strategija padidinti ciklizacijos greitį, Yaohai Bio-Pharma gali pasiekti iki 4 kb sekų ciklizaciją, o ciklizacijos efektyvumas yra didesnis nei 80%.
In vitro RNR ciklizacijos reakcija vyksta taip:
RNR pirmtakas sintetinamas in vitro transkripcijos būdu, o PIE komponentas užbaigia savaiminį susijungimą pagal GTP katalizę, kad susidarytų cirRNR.
Paslaugų informacija
| Procesas | Informacija apie paslaugą | Pristatymo laikotarpis (darbo diena) |
| In vitro transkripcija ir cirkuliacija | Reakcijos sistemos patvirtinimas | 1-2 |
| In vitro transkripcijos ir ciklizacijos reakcijos |
| Rnazės R virškinimas |
| Reakcijos optimizavimas | Reakcijos sudėtis, laiko optimizavimas | 2-5 |
Mūsų funkcijos
- Griežtas bandymo dizainas ir optimizavimas
Galima pasiekti iki 4 kb RNR ciklizacijos.
- Didelis ciklizacijos efektyvumas
Taikant racionalią sekos optimizavimo strategiją, galima pasiekti didesnį nei 80 % ciklizacijos rodiklį.
Griežtai kontroliuojant RNazes eksperimentinėje aplinkoje ir eksploatacinėse medžiagose, veiksmingai užkertamas kelias RNR skilimui.
Atvejo analizė
In vitro ciklizacija ir cirRNR sodrinimas
Remdamasi PIE sistema, Yaohai Bio-Pharma optimizavo cirRNR seką, o ciklizacijos greitis yra didesnis nei 80%, naudojant agarozės gelio elektroforezę (AGE). Naudojant RNazę R praturtinant cirRNR, E-gelio elektroforezės rezultatai rodo, kad linijinis RNR pirmtakas yra virškinamas, o po tolesnio valymo galima pašalinti didžiąją dalį įtrūkusios cirRNR. Valymo tirpalą patys sukūrė Yaohai Bio-Pharma.
In vitro cirkuliacija ir cirRNR sodrinimas
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
