Pasirinktinis saRNA sintezė
Savaimis didinančios mRNA (saRNA), taip pat žinomos kaip replikoninė RNA, koduoja in vitro transkripcijos (IVT) mRNA sekcijas ir viruso replikazos genus, išvestus iš alfa arba flavivirusų. Virusų replikazos genes leidžia savaimis didinti mRNA, kas sukelia didesnę baltymų ekspresiją ir mažesnį reikiamą RNA kiekį palyginti su neidedamosiomis mRNA. Be to, saRNA yra gana didelis molekulės dydis (daugiau nei 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma sukūrė rinkinį mRNA sintezės technologijų, skirtų tiekti neidedamąją mRNA ir savaimis didinančią mRNA (nuo 1000 nt iki 14000 nt), pvz., sekcijų dizainą ir optimizavimą, IVT, šalinimo, liofilizacijos ir lipo nanožvalkalų (LNP) inkapsuliaciją. Visi produktai išleidžiami pagal griežtus kokybės kontrolės standartus.
Kart. 1 Struktūrinės IVT mRNA bruožai: konvencinė, apvalinė ir savarankiškai didinančiosios mRNA.
Savarankiškai didinančiosios mRNA seka
Savarankiškai didinančioji RNA sudaryta iš keturių nestruktūrinių baltymų (vadinamų nsP1, nsP2, nsP3 ir nsP4), kuriuos galiame rasti alfavirusuose, Venesuelos lytų encefalito viruso (VEEV) atveju. Tarp jų nsP1 rodo dviejų enzymų veiklą, vadinamą GTaze ir N7MTaze, o nsP2 turi RTPaze veiklą, kuri yra svarbi ivt mRNA uždengimui su Cap 0 struktūra. Be to, nsP2 veikia kaip proteazė ir helicazė, skatindama visą nsP kompleksą procesuoti. nsP3 tikslus funkcijos bruožas lieka neaiškus, nors jis dalyvauja įvairiose sąveikose su ginejo ląstelėmis, prisidėdamas prie antiviralinės atsakomosios ginejo reakcijos sumažinimo.
Alfaviruso poauginio promotorius (SGP) yra esantis prieš interesus turinčią geną (GOI). SGP elementas skatina GOI transkripcijos pradžią, nesukant sekcijos, kuri koduoja viruso nsP baltymus.
Fig. 2. eGFP saRNA sintezė ir klетinės analizės Yaohai Bio-Pharma RNASci platformoje.
Pasirinktiniai saRNA sprendimai
SaRNA sintezės protokolas yra panašus į mRNA: Individualus mRNA sintezė
- Sekvencijų projektavimas
- Plazmidinis šablonas paruošimas
- in vitro transkripcija (IVT)
- mRNA enzymine korojimo procedūra
- mRNA bendrojo transkripcijos apdorojimas
- mRNA atskyrimas
- mRNA liofilizavimas
- LNP suoblinkimas
- Analizė ir testavimas
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
