Yaohai Bio-Pharma paruošia circRNA pagal PIE sistemą (ekonų ir intronų suderinimą), kuri remiasi pirmosios rūšies intronų savarankiškuoju iškirpimo funkcija siekdama RNA ciklizacijos. PIE struktūra yra sukonstruota naudojant T4 td geną arba žuvies tRNA prekursoriaus geną, o išdėstymas yra toks:
RNA intronas ir palaikomo eksono fragmentas padalijami į du dalis (5' galą ir 3' galą), kur 5' galo sekvencija perkeliama į tikslinės sekos galą, 3' galo sekvencija įterpiama prieš tikslinę seką, o tikslinis geno sekvencija įterpiama viduryje.
Po GTP katalizacijos, PIE struktūra vedą prie ciklizacijos sekcijų, kurios nėra intronai. Sujudama ciklizacijos greičio pagerinimo strategija, Yaohai Bio-Pharma gali pasiekti ciklizaciją iki 4 kb ilgio sekų su daugiau nei 80% ciklizacijos efektyvumu.
Ilg. 1. In vitro circRNA ciklizacija remiantis PIE sistema
Paslaugų detalės
| Procesas |
Neprivalomas Paslauga |
Paslaugų detalės |
Pristatymo Laikotarpis (darbo diena) |
| circRNA sekcijų dizainas ir optimizavimas |
Kodujančių seku dizainas ir optimalizavimas |
CDS sekansų lyginimas
CDS kodono optimizavimas
|
1 |
| Nenuklizinio sekų projektavimas ir optimizavimas |
Introno ir eksono sekos dizainas ir optimizavimas
Homologinės rankos sekos dizainas ir optimizavimas
Tarpinio elemento sekos dizainas ir optimizavimas
|
1-2 |
Bendros strategijos mRNA sekos dizainui
| CircRNA komponentai |
Biologinės funkcijos |
Optimizavimo strategijos |
| Divalio introno ir eksono sekos |
GTP-katalizuojamas introno savitarnavimas ciklizuoti sekas užintrono. |
Sukurtas pagal T4 td genu arba žuvies aliejus tRNA prekursoriaus geną. |
| Kodavimas |
IRES |
Vidinė ribosomo pripažinimo vieta, reguliuojanti circRNA vertimą. |
Skaidymas pagal vidines ribosomos įėjimo vietos (IRES) sekas iš skirtingų virusinių šaltinių, pvz., EMCV, CVB3 šaltinių. |
| CDS |
Sequences koduojančios proteinas, sekuos koduojančios antigenus, antikūnes ar kitus funkcinius baltymus. |
Kodonų optimizavimas padidina vertimo lygį; tam tikri neoptimalūs kodonai gali turėti poveikį baltymo suklaidymui. |
| Nekoduojantis |
Nekoduojančios sekos |
Paskirti miRNAs ar baltymus, kad vykdytų geno ar baltymo reguliaciją. |
Taikant specifinius jungiamosi vietų miRNAs ar baltymams, galima kartoti jungiamosi vietų sekas. |
Mūsų ypatybės
- Sistemos junginys su optimizuotu PIE ciklizavimo sistema ir giliais strategijų analizėmis siekiant pasiekti daugiau nei 80% ciklizavimo tempą;
- Kopinė dirbtinių intelekto algoritmų komandos bendradarbiavimas, siekiant užbaigti CDS regiono kodonų optimizavimą;
- Išaugintas ir tinkamas procesas circRNA gali būti pasiektas aukštu ciklizavimo efektyvumu, aukšta stabilumu ir aukšta vertimų efektyvumu.
Praktinis pavyzdys
Yaohai Bio-Pharma išleido kontrolinį produktą – patobulintą žaliojo fluorescencinio pigmento (eGFP) circRNA, kuris pagrįstas PIE sistema siekiant RNA ciklizavimo.
Naudojant konvencinį transfekcijos reagentą, eGFP circRNA transfekuojama į 293T ląstelę, po 24 valandų galima aptikti eGFP (žalias) fluorescencinį signalą, o po 48 valandų jis stiprina. Fluorescencinis signalas vis dar galima aptikti 7-osios ir 14-osios dienos po transfekcijos.
In vitro eGFP circRNA išraiškos patvirtinimas
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
