Reikšmė mRNA potencinės analizės
Su ribotais mRNA vakcinų ir terapijų plėtojimo tempais reikalingas specifinis analizės metodų rinkinys, skirtas patikslinti potenciją (apibrėžiant jų biologinę veiklą), kuri susijusi su mRNA vertiminiu efektyvumu. Šie metodai dažniausiai yra pagrįsti ląstelėmis transfekcijomis ir tiksliniu proteino funkciniu testavimu.
Yaohai Bio-Pharma siūlo ląstelių pagrįstas potencinės analizės mRNA medžiagoms arba LNP produktams, įskaitant ląstelių transfekciją (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 ląstelės ir kt.) bei ELISA arba Western Blotting (WB) analizes.
Reguliuojamosios institucijos reikalavimai potencinėms analizėms
Pagal tarptautinės sveikatos organizacijos (WHO) reguliavimo nuostatas, „Kiekvieno galutinio vakcino partijos jėga turėtų būti nustatyta naudojant tinkamai kiekybišką ir patvirtintą funkcinią metodą(ar metodus). Galimi in vitro jėgos analizės gali apimti ląstelių transfekcijos sistemos arba transfekcijos nepriklausomus tyrimus“. Be to, JAV farmaceutinių normų komisija (USP) rekomendavo „ląstelių transfekcijos metodą“, kad būtų patikrinta mRNA jėga, t. y. tikslaus bakterinio proteino išraiška.
Procedūra
Žingsnis 1. Ląstelių transfekcija su mRNA arba mRNA-LNP
Ląstelės yra kulturomos ir transfekuojamos su mRNA arba mRNA-LNP. Išsamesniai, mRNA transfekuojama po to, kai ji sumaišoma su transfekcijos reagentu, o mRNA-LNP tiesiogiai transfekuojama į ląsteles. Po 24-48 valandų, centrifugavimo pagalba išskaidykite supranatį, kuris yra išraiškęs proteina.
Žingsnis 2. Tikslaus proteino funkciniai tyrimai
Atlikti ELISA arba WB bandymus, kad įvertintumėte tikslųjį priesininko baltymų funkcinią ryšio gebėjimą.
Praktinis pavyzdys
Ląstelių potencijos bandymai dėl mRNA imčių
Yaohai-BioPharma sukūrė ląstelių pagrįstą potencijos tyrimo metodą dėl mRNA, apimantį ląstelių kultūrą, ląstelių transfekciją ir baltymų funkcinius bandymus. Mes transfekavome eGFP mRNA, mCherry mRNA, luciferazės mRNA, spikinio balties mRNA į 293T ląstelę ir nustatėme tikslųjį baltį per fluorescenciją, šviesmą ar spalvotą signalą, WB, ELISA.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
