RNA 전구체의 배치 준비와 관련하여 일반적으로 사용되는 방법은 시험관 전사(IVT)입니다. IVT 반응은 T7 프로모터를 포함하는 선형화된 플라스미드 DNA를 주형으로 사용하고 T7 RNA 폴리머라제 존재 하에 뉴클레오시드 삼인산(NTP)을 기질로 사용하여 RNA 전구체를 합성합니다.
시험관 내 고리화 방법에는 화학적 결찰, 효소 결찰 및 PIE(permuted intron-exon) 방법이 포함됩니다. 화학적 결찰과 효소적 결찰은 더 짧은 RNA의 고리화에 적합합니다. 단편이 100nt보다 크면 고리화 속도가 크게 감소합니다. 대조적으로, PIE 시스템을 기반으로 하는 뉴클레아제 방법은 8kb 서열의 고리화를 달성할 수 있습니다.
구아노신 삼인산(GTP)의 촉매작용 하에서 PIE 구조는 인트론외 서열의 고리화를 겪습니다. 고리화 속도를 높이기 위한 합리적인 전략과 결합하여 Yaohai Bio-Pharma는 4% 이상의 고리화 효율성으로 최대 80kb 시퀀스의 고리화를 달성할 수 있습니다.
RNA의 시험관 내 고리화 반응은 다음과 같이 진행됩니다.
RNA 전구체는 시험관 내 전사에 의해 합성되고, PIE 성분은 GTP의 촉매 작용 하에서 자가 접합을 완료하여 circRNA를 형성합니다.
서비스 세부정보
| 방법 |
서비스 내용 |
배송기간(평일) |
| 시험 관내 전사 및 순환 |
반응 시스템 확인 |
1-2 |
| 시험관 내 전사 및 고리화 반응 |
| RNase R 소화 |
| 반응 최적화 |
반응 구성, 시간 최적화 |
2-5 |
우리의 특징
최대 4kb의 RNA 고리화가 달성될 수 있습니다.
합리적인 서열 최적화 전략을 통해 80% 이상의 고리화율을 달성할 수 있습니다.
실험 환경 및 소모품의 RNases에 대한 엄격한 제어를 통해 RNA 분해를 효과적으로 방지합니다.
사례 연구
시험관 내 고리화 및 circRNA 농축
Yaohai Bio-Pharma는 PIE 시스템을 기반으로 circRNA 서열을 최적화했으며, 아가로스 겔 전기영동(AGE)에 의한 고리화율은 80% 이상입니다. RNase R을 사용하여 circRNA를 풍부하게 하면 E-gel 전기영동 결과는 선형 RNA 전구체가 소화되고 추가 정제 후에 흠집이 있는 circRNA의 대부분이 제거될 수 있음을 보여줍니다. 정제 용액은 Yaohai Bio-Pharma가 자체 개발했습니다.
circRNA의 체외 순환 및 농축
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