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mRNA 동시 전사 캡핑

mRNA 동시 전사 캡핑

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IVT RNA

mRNA 공동 전사 캡핑

1단계 효소 캡핑과 비교하여 XNUMX단계 동시 전사 캡핑 방법은 공정 흐름을 크게 줄일 수 있습니다. 이 방법은 결과 지향적이며 시험관 내 전사(IVT) 반응에 cap 유사체를 추가하는 것을 포함합니다. Cap 유사체는 전사 시작 시 도입될 수 있으며, 전사가 완료되면 cap 구조를 갖는 mRNA를 얻을 수 있습니다. 현재 XNUMX세대 캡 유사체는 역캡핑을 방지하고 전사 생성물에 캡 XNUMX 구조를 직접 추가할 수 있습니다.

생체 내 mRNA 면역원성과 번역 효율성을 고려하기 위해 IVT 과정은 종종 특정 종류의 변형된 NTP를 채택하며, 일반적인 변형된 뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ), N1-메틸-슈도우리딘(N1Ψ) 및 5-메틸사이토신(5mC)입니다. .

정의되지 않은

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그림: mRNA 동시 전사 및 캡핑 반응의 다이어그램

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공동 전사 캡핑

시험관 내 전사 반응(Clean Cap 유사체)1-2
뉴클레오티드 변형(Ψ/N1Ψ/5mC)
DNA 템플릿 제거(DNase I)

IVT 조건 최적화 - 선택 사항

반응 성분 설계 및 최적화3-7
우리의 특징
  • 다양한 뉴클레오티드 변형 전략

다양한 선택적인 뉴클레오티드 변형 전략은 단백질 발현을 향상시킬 수 있습니다.

  • 최적화된 반응 시스템

높은 전사율과 높은 캡핑 효율을 달성합니다.

  • 안정적인 캡핑 공정

95% 이상의 상한률을 달성하세요.

  • RNase의 엄격한 제어

실험 환경 및 소모품에서 RNase를 엄격하게 제어하여 mRNA 분해를 효과적으로 방지합니다.

사례 연구

Yaohai Bio-Pharma는 클린 캡 유사체를 사용하여 역캡핑을 피하면서 Cap1 구조를 직접 추가하는 성숙한 공동 전사 캡핑 프로세스 플랫폼을 구축했습니다. 표준화된 샘플 전처리 및 모세관 전기영동(CE) 검출 후 향상된 녹색 형광 단백질(eGFP) mRNA의 캡핑 속도는 95% 이상에 도달할 수 있습니다.

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95% 이상의 eGFP mRNA 캡핑 효율

공동 전사 캡핑에 의해 제조된 eGFP mRNA 및 mCherry mRNA는 각각 293T 세포에 형질감염되고, 48시간 후에 강한 형광 신호가 관찰되는데, 이는 mRNA가 293T 세포에서 효율적으로 발현된다는 것을 시사합니다.

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293T 세포에서 eGFP mRNA 및 mCherry mRNA 발현

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