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체외 전사, IVT

체외 전사, IVT

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IVT RNA

IVT, 체외 전사

MRNA의 대량 생산에 있어, 체외 전사 (IVT)는 더 효율적이고 성숙된 방법입니다. IVT 반응은 T7 프로모터를 포함하는 선형화된 플라스미드 DNA를 템플릿으로 사용하며, T7 RNA 폴리머라제가 존재할 때 핵산 삼인산 (NTPs)을 기질로 mRNA가 합성됩니다.

핵산 변형은 mRNA 탐구에서의 돌파구입니다. 변형되지 않은 mRNA 분자는 세포 내 RNA 센서에 의해 인식되어 선천 면역을 활성화합니다. mRNA의 체내 면역원성 및 번역 효율성을 고려할 때, IVT 과정에서는 일반적으로 특정 종류의 변형된 NTPs가 사용되며, 일반적인 변형된 핵산은 유사우라실 (Ψ), N1-메틸-유사우라실 (N1Ψ), 그리고 5-메틸시토신 (5mC)입니다.

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MRNA의 체외 전사 과정

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체외 전사 (IVT) 반응 다이어그램

서비스 세부사항
선택적 서비스
서비스 상세
납기(작업일)
체외 전사 (IVT)
IVT, 체외 전사 1
뉴클레오타이드 변형 (Ψ/N1Ψ/5mC 등)
DNA 템플릿 제거 (DNase I)
IVT 조건 최적화 - 선택사항
IVT 반응 구성 요소 설계 및 최적화 2-5
우리의 특징
  • 다양한 뉴클레오타이드 변형 전략

체내에서 mRNA의 안정성과 단백질 발현을 개선합니다.

  • 엄격한 테스트 설계 및 최적화

최대 10kb까지의 mRNA 프래그먼트 준비가 가능합니다.

  • 효율적인 전사

IVT 반응 조건을 최적화함으로써 전사 효율은 최대 1:200까지 가능합니다.

  • RNase에 대한 엄격한 관리

실험 환경 및 소모품을 통한 RNase의 엄격한 관리는 mRNA 분해를 효과적으로 예방할 수 있습니다.

사례 연구

현재 IVT 반응 시스템은 약 100 nt 길이의 합성 시스템에 대략적으로 최적화되어 있으며, 임의 길이의 mRNA에는 최적화되지 않았습니다. mRNA 서열이 길수록 전사가 어려워지고 분해되기 쉽습니다.

약 10 kb 길이의 맞춤형 mRNA 서열을 준비하기 위해, 야오하이 바이오-파마는 철저한 실험 설계, 반응 조건의 지속적인 최적화, 그리고 RNase의 엄격한 관리를 통해 1 μg의 선형화된 플라스미드를 체외에서 전사하여 높은 전사 비율(1:135)의 고품질 샘플을 성공적으로 준비하고, 초기 정제된 mRNA 제품 135 μg을 획득했습니다.

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mRNA 식별 (아가로스 겔 전기영동)

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