組み換えタンパク質の品質管理と応用

組み換えタンパク質の品質管理は、実験データの信頼性と再現性にとって非常に重要です。プロジェクトの設計から製造プロセスまで、すべてのステップで厳格な品質管理戦略が必要です。

品質管理戦略

産業界は厳格な標準操作手順を遵守していますが、学術界はデータの再現性を向上させるために専門知識を高める必要があります。特定の生物学的用途または生化学的特性を持つタンパク質には、カスタマイズされた品質管理 (QC) 戦略が必要です。

挑戦的な例と解決策

Yaohai Bio-Pharma は、組み換えタンパク質の生産と精製に関する豊富な経験を誇り、専門家チームと連携して、高純度のタンパク質生産を確実に実現します。数百のプロジェクトでの経験を活かし、Yaohai はタンパク質の精製を最適化する方法をわかりやすくまとめています。

核酸結合タンパク質: ヌクレアーゼや PEI 沈殿などの核酸除去手順が必要です。核酸汚染を検出するには、A260nm/A280nm 比を監視します。

クライオ電子顕微鏡用マウスフェリチン重鎖1: 精製手順を最適化し、A260nm/A280nm 比を下げてタンパク質の純度を確保するためにヌクレアーゼを追加する必要があります。

キメラタンパク質ヒトdsRBEC: 細胞溶解には尿素を含む緩衝液を使用し、その後カラム上で再折り畳みを行って機能的に活性なタンパク質を取得します。

二価カチオンに結合するタンパク質: 発現および精製中には特定の二価カチオンを添加する必要があり、キレート剤は避ける必要があります。

鉄硫黄タンパク質: [2Fe ± 2S] クラスターの破壊を防ぎ、正しいタンパク質の折り畳みと機能を確保するために、イミダゾールの使用は避けるべきです。

LLT1の可溶性フラグメント: 変異体設計によりジスルフィド結合の形成とタンパク質の折り畳みが最適化され、安定した高収量のタンパク質が得られます。

CLK1キナーゼの結晶化: λ-ホスファターゼとの共発現によりリン酸化部位からリン酸が除去され、サイズ排除クロマトグラフィー (SEC) と陰イオン交換クロマトグラフィーを使用して、不均一なリン酸化のない均質な CLK1 が得られます。

抗原用タンパク質: 免疫原性の高いタンパク質の混入を避けるため、純度評価が必要です。構造エピトープ抗体の場合、抗原の三次元構造を維持する必要があります。

凝集しやすいタンパク質: 凝集の問題を制限するために、異なる菌株をスクリーニングしたり、培養温度を下げたりする戦略が採用され、迅速な精製戦略が設計されています。

エンドトキシン除去: 正電荷クロマトグラフィーやポリカチオンリガンドアフィニティークロマトグラフィーなどの方法によりエンドトキシンが除去され、LPS レベルが適用限度以下であることが保証されます。

タンパク質複合体: サブユニットは個別に発現され、in vitro で組み立てられるか、共発現されて機能複合体を形成します。複合体の完全性は、均質性とモル質量によって評価されます。

まとめ

タンパク質の生産は、生化学的特性と用途を考慮した戦略的設計から始まります。発現、精製、品質管理の過程で、安定性、非凝集性、天然状態のために条件と方法が最適化されます。精製されたタンパク質は、生物物理学的特性評価など、さまざまな下流用途に使用されます。

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