عملية تصنيع mRNA الخاص بـ eGFP

إنتاج mRNA لبروتين eGFP (البروتين الفلوري الأخضر المُحسَّن) يتضمن سلسلة من تقنيات علم الأحياء الجزيئي لإنتاج جزيء RNA وظيفي يشفر للتعبير عن بروتين eGFP. في مجال mRNA الخاص بـ eGFP، تراكمت لدى شركة Yaohai Bio-Pharma خبرة واسعة لتلبية الاحتياجات الخاصة للعملاء. ومن خلال الاستفادة من خبرتنا، قمنا بتجميع عملية إنتاج mRNA لـ EGFP.

1. استنساخ جين eGFP : يتم الحصول على التسلسل الجيني الذي يشفر لبروتين eGFP. عادةً ما يتم استنساخ هذا الجين من متجه بلاسميدي موجود مسبقًا أو يتم صنعه اصطناعيًا بناءً على التسلسل النوكليوتيدي المعروف. ثم يتم التحقق من الجين المستنسخ باستخدام التسلسل لضمان الدقة.
2. تحسين الجين للتعبير : لتحقيق التعبير الأمثل في النظام المستهدف (على سبيل المثال، الخلايا الحيوانية، البكتيريا، أو أنظمة النسخ الاصطناعي)، قد تخضع جين eGFP لتحسين الكودونات. وهذا يتضمن استبدال الكودونات النادرة في التسلسل الأصلي بواحدة تُستخدم بشكل أكثر شيوعًا في الكائن المضيف، مما يزيد من فرص الترجمة الفعالة.
3. في المختبر إعداد قالب النسخ : بمجرد أن يكون الجين المُحسَّن مستعدًا، يتم دمجه في حامل مناسب، غالبًا ما يكون بلاسميد، يحتوي على العناصر التنظيمية اللازمة للنسخ (مثل تسلسل المروج). يخدم هذا البلاسميد كقالب للنسخ الاصطناعي.
4. في المختبر النسخ : باستخدام القالب البلازميدي المُعد مسبقًا، يتم إجراء الترجمة الخارجية للخلايا لتصنيع رنا البروتين الأخضر المضيء (eGFP mRNA). يشمل هذا العملية استخدام إنزيمات بوليميراز RNA، والتي تعرف على تسلسل المروِّج وتبدأ عملية النسخ، مما ينتج سلسلة RNA متممة للقالب DNA. بناءً على التطبيق المطلوب، يمكن وضع قبعات على رنا الرسول، وإضافة ذيول البولي أدينيل، و/أو تعديله لتحسين الاستقرار وكفاءة الترجمة.
5. التنقية والتحكم في الجودة : ثم يتم تنقية رنا البروتين الأخضر المضيء المُصنع لإزالة أي ملوثات، بما في ذلك الحمض النووي، والبروتينات، والنукليوتيدات الحرة. يمكن أن تشمل طرق التنقية الفصل الكهربائي بالجيل، أو كروماتوجرافيا العمود، أو الفصل المستند إلى الكرة المغناطيسية. بعد التنقية، يتم تحليل رنا الرسول للتحقق من جودته، بما في ذلك التركيز، والنقاء، والسلاسة باستخدام تقنيات مثل الطيف الضوئي فوق البنفسجي والمرئي والفصل الكهربائي بالجيل.
6. التخزين والتوصيل : يتم تخزين mRNA eGFP النقي عادةً عند درجات حرارة منخفضة للحفاظ على استقراره. وللاستخدام التجريبي، يمكن تسليم mRNA إلى الخلايا باستخدام طرق مختلفة، بما في ذلك التحلل الكهربائي، الليفكتشين، أو المتجهات الفيروسية، حسب التطبيق والخلية المستهدفة.
7. التعبير والتحقق : بمجرد دخوله إلى الخلية، يتم ترجمة mRNA eGFP إلى البروتين الفلوري الأخضر المعزز، والذي يمكن مشاهدته باستخدام المجهر الفلوري. هذا يسمح بالتحقق من نجاح إنتاج وتسليم وتعبير mRNA.

باختصار، يتضمن إنتاج mRNA eGFP ت клون الجين، تحسينه للتعبير، إعداد قالب للنسخ الريبي خارج الجسم، تنفيذ ردة فعل النسخ، تطهير mRNA الناتجة، وأخيرًا تسليمها إلى الخلايا للتعبير والتحقق.

نحن نبحث أيضًا بنشاط عن شركاء عالميين من المؤسسات أو الأفراد. نقدم أكثر التعويضات تنافسية في الصناعة. إذا كان لديك أي أسئلة، لا تتردد في التواصل معنا: [email protected]