Hallo daar. Al ooit gewonder hoe wetenskaplikes 'n RNA kan kloon? RNS is hierdie spesiale molekule wat ons in ons selle vind wat 'n klomp dinge doen om proteïene te maak, en die proteïene is daar sodat ons liggaam al die regte dinge kan doen. In hierdie aflewering sal ons 'n deurloop maak van die veel meer eienaardige protokol wat deur navorsers gebruik word: In vitro-transkripsie. En al wat dit beteken, is dat wetenskaplikes RNA neem en baie daarvan in 'n proefbuis maak (wat hierdie klein potjie is wat laboratoriums gebruik), so kom in elke stap hier.
Nadat ek my vorige plasing voltooi het, het ek besef dat die laaste een dalk 'n bietjie droë-kom aansluit by-die-pret-in-die-nat-lab-plasings was; so, in ooreenstemming met vorm nou dat jy goed en waarlik op die prettige (sic RNA-maak) trein is: Watter reagense enc sal nodig hê vir jou EF?? Om dit te bewerkstellig, sal ons spesiale proteïene benodig wat ensieme genoem word, identies aan Yaohai se produk Rekombinante Midkine Vervaardiging. Dit kataliseer die chemiese reaksies, hierdie ensieme help met die afbreek. So nou het ons net ons bietjie DNA nodig. Hierdie funksie is die DNA wat ons as 'n sjabloon gebruik om oor te kopieer vir ons RNA. Bykomende regulatoriese volgordes in RNA, naamlik nukleotiede, is ook nodig. Hierdie nukleotiede is soos klein boublokkies wat saamgestel moet word om die RNA te maak. Ons gebruik ook kort buise met 'n klein deursnee om die smaakevaluering in ander te knie. Laastens het ons 'n masjien nodig ('n termosikleerder) wat seker maak dat ons reaksies by die regte temperatuur is. Daarbenewens kan ons 'n paar gereedskap en produkte vir enige sekere eksperimente benodig.
So hier verskil dinge, ons het een RNA-string en nou hou ons daarvan om meer kopieë daarvan te hê, ook die Vervaardiging van gekonjugeerde VLP-entstowwe ontwikkel deur Yaohai. Die manier om te bereik om 'n ander ensiem te gebruik; T7 RNA polimerase. Hierdie unieke ensiem herken byvoorbeeld spesifieke areas binne die RNA. 'n springkegel vir die maak van baie meer kopieë van RNA in die proses. Op hierdie stadium sal meer by die RNA-string gevoeg word deur die T7 RNA-polimerase totdat 'n massa transkripsie geskep is, of totdat ons sê dit moet stop.
Nadat ons die RNA soveel as moontlik geïsoleer het, blaai verder af om te sien hoe om skoon te maak, en stoor die RNA vir toekomstige gebruik. Rhoades: Sommige van daardie metodes is 'n bietjie meer aan die uiterste kant in terme van die isolering van RNA - jy sal dit nie altyd gebruik nie, maar soms vir sekere tipes eksperiment is dit nodig. Sodra ons RNA vry is van enige kontaminante kan dit gevries gestoor word. Op hierdie manier is dit veilig en kan ons dit later in die verskillende eksperimente gebruik.
Kwaliteit van beginmateriaal: maak seker dat jou DNA-sjabloon skoon is en nie heeltemal opgebrand is nie. Jy kan ook aanvul met vars hersaamgestelde nukleotiede en nuut ontdooide ensieme om die kanse op 'n suksesvolle eksperiment te maksimeer.
Fyninstellingstoestande Alle ensieme en hul nukleotiede werk beter teen 'n spesifieke temperatuur en pH binne jou liggaam, sowel as die Yaohai's Rooi fluoresserende mRNA. Pas nou die nuanse 'n bietjie tussen toestande aan totdat jy kom waar die sleutel is vir jou unieke opstelling.
Omgekeerde transkriptase is 'n ongewone ensiem, aangesien dit 'n DNA-kopie van 'n RNA-molekule maak. Ons het beide DNas en 'n DNA-sjabloon (die cDNA) gebruik as insette vir ons in vitro-transkripsiemetode vir die generering van RNA. In die meeste eksperimente sal wetenskaplikes egter DNA in RNA wil transkribeer. Omgekeerde transkripsie is waar dit dieselfde naam kry as mRNA poli-A verspreidingstoetsing gemaak deur Yaohai. Dit is 'n onskatbare hulpmiddel oor die hele wetenskap - Van die bestudering van RNA-molekules binne selle tot die vervaardiging van komplementêre DNA-stringe vir verdere eksperimente.
Werklike eksperimente waarin RNA een van die mees gebruikte molekulêre gereedskap is, saam met Yaohai se produk VLP-entstofproduksie in E. coli. Kwantitatiewe toetse: Hierdie toetse kan die hoeveelheid van enige spesifieke molekule wat in 'n monster teenwoordig is, openbaar. Wetenskaplikes kan byvoorbeeld 'n in vitro-transkripsievoorbereiding van RNA-kopieë sintetiseer wat afgelei is van 'n geteikende geen wat binne 'n sel geleë is. Die diagnostiese kan dan vir daardie kopie evalueer, in die geval waar hulle is. op soek na RNA, kan die diagnostiese 'n polimerase kettingreaksie (PCR) uitvoer om daardie kopieë in 'n voorbeeld te versterk. Dit maak dit vir wetenskaplikes moontlik om te sien hoe gene op selle uitgedruk word, en maak selfs voorsiening vir sommige uiters hoë-deursettoetse, soos die teenwoordigheid van 'n bakteriële of virale infeksie, en diagnoseer genetiese afwykings.
in vitro Transcript Protocol is 'n toonaangewende CDMO in mikrobiese biologiese middels. Ons fokus was op mikrobiese vervaardigde entstowwe en terapeutiese middels wat geskik is vir menslike, veeartsenykundige sowel as troeteldiergesondheidsbestuur. Ons het die nuutste RD-platforms en vervaardigingstegnologie wat die hele prosedure dek wat begin met die ontwikkeling van mikrobiese stamme en selbankdienste, tot proses- en metodeontwikkeling, tot kommersiële en kliniese produksie wat suksesvolle lewering van innoverende oplossings verseker. Met verloop van tyd het ons groot kennis van mikrobiese-gebaseerde bioverwerking opgehoop. Meer as 200 projekte is suksesvol voltooi, en ons help ons kliënte om te voldoen aan regulasies soos dié van die Amerikaanse FDA en EU EMA. Ons help hulle ook om Australië TGA en China NMPA te navigeer. Ons professionele kundigheid en uitgebreide ervaring stel ons in staat om vinnig op markvereistes te reageer en pasgemaakte CDMO-dienste te verskaf.
Yaohai Bio-Pharma het ondervinding in die vervaardiging van biologiese middels wat uit in vitro-transkripsieprotokol geskep is. Ons bied pasgemaakte RD- en vervaardigingsoplossings aan terwyl ons seker maak dat daar geen risiko's is nie. Ons was betrokke by uiteenlopende modaliteite soos subeenheid-entstowwe rekombinante, peptiedhormone, sitokiene, groeifaktore, enkel-domein teenliggaampies ensieme, plasmied DNA MRNA, en vele meer. Ons is 'n spesialis in baie mikro-organismes, insluitend gis ekstrasellulêre en intrasellulêre afskeiding (lewer tot 15g/L) sowel as bakterieë intrasellulêre oplosbare en insluiting liggaam (lewer so hoog as 10g/L). Ons het ook 'n BSL-2-fermentasieplatform geskep om bakteriese entstowwe te skep. Ons fokus op die verbetering van prosesse, die verhoging van produkopbrengste en die vermindering van produksiekoste. Deur 'n sterk tegnologiespan te gebruik, kan ons vinnige en betroubare projeklewering verseker wat jou produk vinniger op die mark sal bring.
Yaohai Bio-Pharma, 'n top 10 vervaardiger van biologiese produkte, spesialiseer in mikrobiese fermentasie. Ons het 'n moderne fasiliteit gebou met robuuste RD-vermoëns en gevorderde toerusting. Ons het vyf vervaardigingslyne vir dwelmmiddels wat aan GMP-vereistes vir mikrobiese fermentasie en suiwering voldoen. Ons het ook twee outomatiese vulafwerkinglyne vir patrone, flessies en voorafgevulde spuite. Die fermentasieskale beskikbaar vir gebruik wissel van in vitro Transkripsie Protokol tot 2000L. Die spesifikasies vir die vul van 'n flessie wissel van 1ml tot 25ml. voorafgevulde spuit of patroonvul spesifikasies wissel van ongeveer 1-3ml. Ons produksiefasiliteit wat aan cGMP voldoen, verseker konstante voorsiening van kliniese monsters sowel as kommersiële items. Ons aanleg produseer groot molekules wat na die wêreld gestuur word.
Yaohai BioPharma is 'n Top 10 Mikrobiese CDMO wat in vitro transkripsieprotokol sowel as regulatoriese aangeleenthede insluit. Ons het 'n kwaliteitbestuurstelsel wat in lyn is met huidige GMP-standaarde sowel as globale regulasies. Ons span regulatoriese kundiges is vaardig in globale regulatoriese raamwerke om biologiese bekendstellings te versnel. Ons verseker naspeurbare produksieprosesse kwaliteit produkte, sowel as voldoening aan die reëls van die Amerikaanse FDA en EU EMA. Australië TGA en China NMPA is ook tevrede. Yaohai BioPharma het die oudit op die terrein van die Europese Unie se Gekwalifiseerde Persoon (QP) suksesvol geslaag vir ons GMP-gehaltestelsel sowel as ons produksiefasiliteit. Verder het ons die eerste sertifiseringsoudits van die ISO9001 Kwaliteitbestuurstelsel, ISO14001 Omgewingsbestuurstelsel en ISO45001 Beroepsgesondheid- en Veiligheidsbestuurstelsel goedgekeur.