Proces produkcji mRNA eGFP

Produkcja mRNA eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) obejmuje szereg technik biologii molekularnej w celu wygenerowania funkcjonalnej cząsteczki RNA, która koduje ekspresję eGFP. W obszarze mRNA eGFP firma Yaohai Bio-Pharma zgromadziła duże doświadczenie w zaspokajaniu specyficznych potrzeb klientów. Wykorzystując nasze doświadczenie, zsyntetyzowaliśmy przepływ procesu produkcji mRNA EGFP.

1. Klonowanie genu eGFP: Aby uzyskać sekwencję genu kodującego eGFP. Ten gen jest zazwyczaj klonowany z istniejącego wektora plazmidowego lub syntetyzowany sztucznie na podstawie znanej sekwencji nukleotydowej. Sklonowany gen jest następnie weryfikowany poprzez sekwencjonowanie w celu zapewnienia dokładności.
2. Optymalizacja genów pod kątem ekspresji: Aby uzyskać optymalną ekspresję w systemie docelowym (np. komórki ssaków, bakterie lub systemy transkrypcji in vitro), gen eGFP może przejść optymalizację kodonów. Obejmuje to zastąpienie rzadkich kodonów w oryginalnej sekwencji częściej używanymi kodonami w organizmie gospodarza, zwiększając szanse na skuteczną translację.
3. In vitro Przygotowanie szablonu transkrypcji:Gdy zoptymalizowany gen jest gotowy, jest on włączany do odpowiedniego wektora, często plazmidu, który zawiera elementy regulacyjne niezbędne do transkrypcji (np. sekwencję promotora). Ten plazmid służy jako matryca do transkrypcji in vitro.
4. In vitro Transkrypcja: Używając przygotowanego szablonu plazmidowego, przeprowadza się transkrypcję in vitro w celu syntezy mRNA eGFP. Proces ten obejmuje użycie enzymów polimerazy RNA, które rozpoznają sekwencję promotora i inicjują transkrypcję, wytwarzając komplementarny łańcuch RNA do szablonu DNA. W zależności od pożądanego zastosowania, mRNA może być zakapsulkowane, poliadenylowane i/lub modyfikowane w celu zwiększenia stabilności i wydajności translacji.
5. Oczyszczanie i kontrola jakości: Syntetyzowany mRNA eGFP jest następnie oczyszczany w celu usunięcia wszelkich zanieczyszczeń, w tym DNA, białek i wolnych nukleotydów. Metody oczyszczania mogą obejmować elektroforezę żelową, chromatografię kolumnową lub separację na bazie kulek. Po oczyszczeniu mRNA jest analizowane pod kątem jakości, w tym stężenia, czystości i integralności, przy użyciu technik takich jak spektrofotometria UV-Vis i elektroforeza żelowa.
6. Przechowywanie i dostawa:Oczyszczony eGFP mRNA jest zazwyczaj przechowywany w niskich temperaturach, aby zachować stabilność. Do użytku eksperymentalnego mRNA może być dostarczany do komórek za pomocą różnych metod, w tym elektroporacji, lipofekcji lub wektorów wirusowych, w zależności od konkretnego zastosowania i typu komórki docelowej.
7. Wyrażenie i weryfikacja:Po dostaniu się do komórki mRNA eGFP jest tłumaczone na wzmocnione zielone białko fluorescencyjne, które można uwidocznić za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej. Pozwala to na weryfikację pomyślnej produkcji, dostarczania i ekspresji mRNA.

Podsumowując, produkcja mRNA eGFP obejmuje klonowanie genu, optymalizację jego ekspresji, przygotowanie matrycy transkrypcyjnej in vitro, przeprowadzenie reakcji transkrypcji, oczyszczenie powstałego mRNA i na koniec dostarczenie go do komórek w celu ekspresji i weryfikacji.

Aktywnie poszukujemy także partnerów instytucjonalnych lub indywidualnych na całym świecie. Oferujemy najbardziej konkurencyjne wynagrodzenie w branży. Jeśli masz jakiekolwiek pytania, skontaktuj się z nami: [email protected]