Proces produkcyjny mRNA eGFP

Produkcja mRNA eGFP (Zintensyfikowanego Zielonego Błyskającego Białka) obejmuje szereg technik biologii molekularnej w celu wygenerowania funkcjonalnego cząsteczki RNA, która koduje dla ekspresji eGFP. W dziedzinie mRNA eGFP Yaohai Bio-Pharma zgromadziła rozległe doświadczenie w dostosowywaniu się do konkretnych potrzeb klientów. Korzystając z naszego doświadczenia, zsynchroizowaliśmy przepływ procesów produkcyjnych mRNA EGFP.

1. Klonowanie genu eGFP : Aby uzyskać sekwencję genu kodującego dla eGFP. Ten gen jest zwykle klonowany z istniejącego wektora plazmidowego lub syntetycznie syntezowany na podstawie znanej sekwencji nukleotydowej. Sklonowany gen jest następnie weryfikowany za pomocą sekwencjonowania, aby zapewnić dokładność.
2. Optymalizacja genu dla ekspresji : Aby osiągnąć optymalne wyrażanie w systemie docelowym (np. komórkach ssaków, bakteriach lub sistemach in vitro na potrzeby transkrypcji), gen eGFP może ulec optymalizacji kodonów. Polega to na zastępowaniu rzadkich kodonów w oryginalnym ciągu częściej używanymi w organizmie gospodarzu, co zwiększa szanse na efektywną translację.
3. W vitro Przygotowanie Szablonu Transkrypcji : Gdy zoptymalizowany gen będzie gotowy, jest on wstawiany do odpowiedniego wektora, często plazmydu, który zawiera elementy regulujące niezbędne do transkrypcji (np. sekwencję promotorową). Ten plazmid służy jako szablon dla transkrypcji in vitro.
4. W vitro Transkrypcja : Wykorzystując przygotowany szablon plazmidowy, przeprowadza się transkrypcję in vitro w celu syntezy mRNA eGFP. Proces ten obejmuje użycie enzymów polimerazy RNA, które rozpoznają sekwencję promotorową i inicjują transkrypcję, produkując łańcuch RNA komplementarny do szablonu DNA. W zależności od zamierzonego zastosowania, mRNA może być zakapowane, poliadenylowane i/lub zmodyfikowane w celu zwiększenia stabilności i efektywności translacji.
5. Czyszczenie i kontrola jakości : Syntetyczny mRNA eGFP jest następnieoczyszczany w celu usunięcia wszelkich zanieczyszczeń, w tym DNA, białek i swobodnych nukleotydów. Metody oczyszczania mogą obejmować elektroforezę gelową, chromatografię kolumnową lub separację opartą na cząsteczkach magnetycznych. Po oczyszczeniu, mRNA jest analizowane pod kątem jakości, w tym stężenia, czystości i integralności, za pomocą technik takich jak spektrofotometria UV-Vis i elektroforeza gelowa.
6. Przechowywanie i dostarczanie : Zwykle mRNA eGFP po oczyszczeniu przechowywane jest przy niskich temperaturach, aby zapewnić stabilność. W celach doświadczalnych mRNA może być dostarczana do komórek za pomocą różnych metod, w tym elektroporacji, lipofekcji lub wektorów wirusowych, w zależności od konkretnego zastosowania i typu komórki docelowej.
7. Ekspresja i weryfikacja : Po wprowadzeniu do komórki, mRNA eGFP jest przetłumaczona na zintensyfikowany białko fluorescencyjne zielone, które można zwizualizować za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej. Pozwala to na weryfikację pomyślnej produkcji, dostarczenia i ekspresji mRNA.

Podsumowując, produkcja mRNA eGFP obejmuje klonowanie genu, optymalizację go pod kątem ekspresji, przygotowanie szablonu transkrypcji in vitro, wykonywanie reakcji transkrypcji, oczyszczanie uzyskanego mRNA oraz w końcu jego dostarczanie do komórek w celu ekspresji i weryfikacji.

Szukamy również globalnych partnerów instytucjonalnych lub indywidualnych. Ofiarowujemy najbardziej konkurencyjne wynagrodzenie w branży. Jeśli masz jakiekolwiek pytania, prosimy o kontakt: [email protected]