Wspieranie metod modyfikacji reporterowego RNA

Przy wyborze, która metoda modyfikacji reporterowego mRNA jest preferowana, nie ma jednoznacznej odpowiedzi, ponieważ każda metoda i gen reporterowy mają swoje zalety i scenariusze zastosowania. Oto kilka powszechnych metod modyfikacji mRNA i genów reporterowych, wraz z ich cechami i przydatnością.

Metody modyfikacji mRNA

Metylacja:

1. m6A: Związane ze stabilnością mRNA, splicingiem, translacją i przetwarzaniem miRNA. Wyzwania związane z wykrywaniem obejmują wybór przeciwciał i lokalizację.
2. 5' Nasadka Nm:Wzmacnia stabilność, splicing, poliadenylację i eksport jądrowy. Pomaga odróżnić własne RNA od obcego RNA.
3. Pseudourydylacja: Zmienia kodony, zwiększa stabilność i reaguje na stres. Katalizowane przez syntazy pseudourydynowe.

Wprowadzenie do nukleotydów nienaturalnych:

1. Wprowadzony podczas transkrypcji z podwójną strategią modyfikacji chemicznej. Zwiększa stabilność, wydajność i ekspresję białka.

Geny reportera

1. Gen zielonego białka fluorescencyjnego (GFP): Zalety: Łatwe do wykrycia, stabilne właściwości fluorescencyjne, nietoksyczne dla komórek, odpowiednie do obrazowania żywych komórek. Wady: Ograniczona intensywność fluorescencji.
2. Wzmocnione zielone białko fluorescencyjne (eGFP):Zalety: Ponad 6 razy jaśniejszy od dzikiego typu GFP, co czyni go bardziej odpowiednim genem reporterowym do badania ekspresji genów, regulacji, różnicowania komórek oraz lokalizacji i transportu białek w organizmach.
3. Czerwone białka fluorescencyjne (np. mCherry): Zalety: Dłuższe fale wzbudzenia i emisji, co skutkuje niższym tłem podczas obrazowania wewnątrzkomórkowego, doskonałą jasnością fluorescencji i fotostabilnością oraz niższą toksycznością komórkową. Wady: Może nie być tak powszechnie stosowany jak GFP w niektórych warunkach eksperymentalnych.
4. Lucyferaza świetlika: Zalety: W obecności ATP, jonów magnezu i tlenu może katalizować utlenianie lucyferyny do oksylucyferyny, emitując bioluminescencję. Nadaje się do stosowania jako kontrola w celu badania wydajności translacji genów docelowych w komórkach ssaków, żywotności komórek i w badaniach obrazowania in vivo.

Podsumowanie

Wybierając metodę modyfikacji reporterowego mRNA, która jest preferowana, zależy to od konkretnych celów eksperymentalnych, tła badawczego i warunków eksperymentalnych. Na przykład, jeśli wymagana jest wysoka czułość, eGFP może być lepszym wyborem. Jeśli obrazowanie przy dłuższych długościach fal jest potrzebne do zmniejszenia zakłóceń tła, bardziej odpowiednie mogą być czerwone białka fluorescencyjne, takie jak mCherry. Ponadto, w oparciu o konkretne potrzeby modyfikacji mRNA (np. zwiększenie stabilności, poprawa wydajności translacji), można wybrać odpowiednią metodę modyfikacji.

Jako pierwszy i największy CRDMO zajmujący się mikrobiologicznymi produktami biologicznymi w Chinach, Yaohai Bio-Pharma oferuje kompleksowe rozwiązania dostosowane do potrzeb klienta lub samodzielne usługi obejmujące syntezę RNA, inżynierię i konstrukcję szczepów, rozwój procesów w górę i w dół łańcucha dostaw, produkcję substancji leczniczych na poziomie GMP lub nie-GMP, a także usługi napełniania i wykańczania dla różnych modalności, takich jak mRNA, circRNA, RNA plazmidowe, białka rekombinowane, peptydy, enzymy, przeciwciała jednodomenowe i VLP do użytku u ludzi i zwierząt.

Yaohai Bio-Pharma aktywnie poszukuje również instytucjonalnych lub indywidualnych partnerów globalnych i oferuje najbardziej konkurencyjne wynagrodzenie w branży. Jeśli masz jakiekolwiek pytania, skontaktuj się z nami: [email protected]