Promowanie metod modyfikacji RNA raportera

Kiedy wybieramy, która metoda modyfikacji mRNA jest wolisana, nie ma jednoznacznej odpowiedzi, ponieważ każda metoda i gen raportujący mają swoje zalety i odpowiednie scenariusze zastosowania. Oto niektóre powszechne metody modyfikacji mRNA i geny raportujące wraz z ich cechami i przydatnością.

metody modyfikacji mRNA

Metylacja:

1. m6A : Kojarzona z stabilnością mRNA, przycinaniem, tłumaczeniem oraz przetwarzaniem miRNA. Wyzwania związane z wykrywaniem obejmują wybór antyciała i lokalizację.
2. 5' Kap Nm : Zwiększa stabilność, przycinanie, poliadenylację i eksport jądrowy. Pomaga rozróżniać RNA własny od RNA obcego.
3. Pseudourydylacja : Modyfikuje kodony, zwiększa stabilność i reaguje na stres. Katalizowana przez syntazy pseudourydyny.

Wprowadzenie nietypowych nukleotydów:

1. Wprowadzono podczas transkrypcji za pomocą strategii dwustopniowej modyfikacji chemicznej. Zwiększa ona stabilność, wydajność i ekspresję białek.

Geny raportujące

1. Gen Błękitnego Fluorescentnego Białka (GFP) : Zalety: Łatwo wykrywane, stabilne właściwości fluorescencyjne, nieniszczące komórek, odpowiednie do obrazowania żywych komórek. Wady: Ograniczona intensywność fluorescencji.
2. Zintensyfikowane Błękitne Fluorescentne Białko (eGFP) : Zalety: Ponad 6 razy jaśniejsze niż GFP dzikiego typu, co czyni je bardziej odpowiednim genem raportującym do badania ekspresji genu, regulacji, różnicowania komórek oraz lokalizacji i transportu białek w organizmach.
3. Czerwone Fluorescentne Białka (np. mCherry) : Zalety: Dłuższe długości fal pobudzenia i emisji, co prowadzi do mniejszego tła podczas obrazowania wewnątrzkomórkowego, doskonała jasność fluorescencji i fotostabilność oraz mniejsza toksyczność dla komórek. Wady: Mogą nie być tak powszechnie używane jak GFP w niektórych warunkach eksperymentalnych.
4. Lucyferaza komara : W założeniach: W obecności ATP, jonów magnezu i tlenku, może katalizować oxidację lucyferyny w oksylucyferynę, emitując bioluminescencję. Jest odpowiedni do użytku jako kontrola w badaniu efektywności translacji genów docelowych w komórkach ssaków, viabilności komórek oraz asesów obrazowania in vivo.

Wnioski

Wybór metody modyfikacji mRNA reporterów zależy od konkretnych celów eksperymentalnych, tła badawczego i warunków laboratoryjnych. Na przykład, jeśli wymagana jest wysoka czułość, eGFP może być lepszym wyborem. Jeśli potrzebne jest obrazowanie w dłuższych falach światła, aby zmniejszyć zakłócenia tła, białka fluorescencyjne czerwone, takie jak mCherry, mogą być bardziej odpowiednie. Ponadto, na podstawie konkretnych potrzeb modyfikacji mRNA (np. wzmacnianie stabilności, poprawa efektywności translacji), można wybrać odpowiednią metodę modyfikacji.

Jako pierwsze i największe CRDMO mikrobiologiczne w Wielkiej Chinie, Yaohai Bio-Pharma oferuje kompleksowe, dostosowane rozwiązania lub niezależne usługi, od syntezy RNA, inżynierii i konstrukcji szczepów, opracowywania procesów górnego i dolnego strumienia, po produkcję substancji czynnych na poziomie GMP lub nie-GMP oraz usługi wypełniania dla różnych modalności, takich jak mRNA, circRNA, plazmidowe RNA, rekombinujące białka, peptydy, enzymy, pojedyncze domeny antyciała oraz VLPs do użytku u ludzi i zwierząt.

Yaohai Bio-Pharma aktywnie poszukuje globalnych partnerów instytucjonalnych lub indywidualnych i oferuje najbardziej konkurencyjne wynagrodzenie w branży. Jeśli masz jakiekolwiek pytania, prosimy o kontakt: [email protected]