Plasmide-DNA, zoals in vitro transcriptie (IVT)-sjabloon, is een belangrijke grondstof voor de productie van mRNA. Hoge opbrengst, hoge zuivering en hoge terugwinning van plasmide-DNA zijn de belangrijkste doel van de persoon tijdens de ontwikkeling van plasmideprocessen.
Yaohai Bio-Pharma biedt een totaaloplossing voor de ontwikkeling van plasmiden, inclusief upstream (fermentatie), downstream (zuivering) procesontwikkeling, proceskarakterisering en procesvalidatie. We hebben uitgebreide ervaring met het verbeteren van de plasmideopbrengst en het isoleren ervan uit complexe matrices door het ontwikkelen en optimaliseren van processen voor fermentatie, zuivering en verwijdering van onzuiverheden.
Het basisbioproces voor de productie van plasmiden omvat: Escherichia coli (E. coli) fermentatie, celoogst en alkalische lyse, klaring, concentratie, driestapschromatografieproces (vangst, tussentijdse zuivering en polijsten) en concentratie.
dienst Details | Eenheidsoperaties | parameters |
E. coli fermentatie |
Schud de kolf | Mediasamenstellingen, antibioticum, inoculumvolume, groeitemperatuur, enz. |
vergister (7 L) |
Antibioticum, inoculumvolume, groeitemperatuur, pH, opgeloste zuurstof (DO), voedingsmodus (bijv. Fed-batch), voedingsmedia, fermentatietijd, enz. |
|
Cel oogst | microfiltratie | Standaard E. coli oogstproces |
Cel lysis | Celresuspendering, alkalische lyse, neutralisatie | Alkaliverhouding, lysetijd |
Verduidelijking | Filtratie | Ruwe filtratie, 20 µm en een 5 µm filtreertrein (bij voorkeur) |
Concentratie | Ultrafiltratie, tangentiële stroomfiltratie | Poriegrootte (of NMWC), transmembraandruk (TMP), flux, verhouding filtraatvolume tot membraanoppervlak |
Driestapschromatografie | Grootte-uitsluitingschromatografie (SEC) of gelfiltratiechromatografie (GFC) | Kolomlengte en -diameter, buffersamenstelling, injectievolume, samenstelling van de mobiele fase (adsorptie en desorptie), pH, stroomsnelheid, evenwicht, binding, was- en elutieomstandigheden. |
Affiniteitschromatografie (AF) | ||
Anionenuitwisselingschromatografie (AEX) | ||
Concentratie | Ultrafiltratie, tangentiële stroomfiltratie | Poriegrootte (of NMWC), transmembraandruk (TMP), flux, verhouding filtraatvolume tot membraanoppervlak |
Meer biologische zuiveringsprocesoplossingen |