Rekombinanto proteīnu ražošana: inženierijas E. coli celmi

Escherichia coli (E. coli) ir bijusi nozīmīga loma rekombinanto proteīnu ražošanā biofarmācijas nozarē, kas kalpo kā pirmais ekspresijas vektors bioloģisko zāļu ražošanā. E. coli lepojas ar strauju augšanu, ērtu ģenētisku manipulāciju un ātru rekombinanto proteīnu sintēzi, kā arī citas priekšrocības. Plašas modifikācijas ir padarījušas E. coli par optimālu izvēli proteīnu ekspresijai, kā rezultātā tika izstrādāti dažādi E. coli celmi.

Yaohai Bio-Pharma specializējas vienas pieturas ārpakalpojumu sniegšanā fermentācijas, attīrīšanas, formulēšanas procesa izstrādei un virknes biofarmaceitisko līdzekļu ražošanai, izmantojot E. coli ekspresijas sistēmas. Runājot par Yaohai plašo pieredzi, mēs apkopojām, ka rekombinanto olbaltumvielu ražošanai tiek izmantoti četri izplatīti E. coli celmi un to īpašības.

BL 21 celms

BL21 celmam, kas iegūts no E. coli B līnijas, trūkst Lon proteāzes un ārējās membrānas proteāzes OmpT. Lon proteāze galvenokārt noārda eksogēnos proteīnus, savukārt OmpT galvenokārt noārda ārpusšūnu matricas proteīnus. Šo divu galveno proteāžu trūkums var efektīvi novērst rekombinanto proteīnu noārdīšanos.

Origami celms

Origami celmam, E. coli K-12 atvasinājumam, ir mutācijas tioredoksīna reduktāzē un glutationa reduktāzē, kas veicina pareizi salocītu proteīnu veidošanos, kas satur disulfīda saites, un uzlabo olbaltumvielu šķīdību. Origami celms, ieskaitot Origami, Origami 2 un Origami B, ir piemērots aktīvo proteīnu ekspresijai, kas satur disulfīda saites.

SHuffle celms

SHuffle celms konstitutīvi ekspresē disulfīda saites izomerāzi DsbC citoplazmā, veicinot pareizu disulfīda saišu veidošanos oksidētajos proteīnos. Tas kalpo arī kā molekulārais chaperons olbaltumvielu locīšanai, palīdzot veidot pareizo konformāciju.

Rosetta celms

Rosetta celms papildina E. coli ar tRNS, kas atbilst retajiem kodoniem, lai uzlabotu eksogēno gēnu, īpaši eikariotu gēnu, ekspresijas līmeni prokariotu sistēmās. Atvasināts no BL21 un satur hloramfenikolu rezistentu pRARE plazmīdu, tas papildina sešus tRNS, kas atbilst retajiem kodoniem (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC un GGA), kas sākotnēji nebija E. coli, nodrošinot "universālāku" proteīna ekspresiju.

Secinājumi

Trīs galvenie faktori veiksmīgai rekombinanto proteīnu ražošanai ir saimnieks, vektors un audzēšanas apstākļi. Pamatojoties uz izpratni par rekombinantā proteīna fizikāli ķīmiskajām īpašībām, katra celma unikālajām priekšrocībām un eksperimenta īpašajām vajadzībām, jāizvēlas piemērotākais saimnieks. Turklāt, lai uzlabotu proteīna ekspresiju, ir jāoptimizē tādi faktori kā plazmīdu vektori, temperatūra un induktori.

Yaohai Bio-Pharma arī aktīvi meklē institucionālus vai individuālus globālus partnerus un piedāvā viskonkurētspējīgāko atlīdzību nozarē. Ja jums ir kādi jautājumi, lūdzu, sazinieties ar mums: [email protected]