Rekombinantu olbaltumvielu ražošana: inženierizētie E. coli šķirnes

Escherichia coli (E. coli) ir spēlējusi nozīmīgu lomu rekombinantu oliešu ražošanā birofarmaceitiskajā nozarē, kļūstot par pirmo izpausmes vektoru bioloģiskās medicīnas ražošanai. E. coli piedāvā ātru augšanas tempu, vieglu genetisko manipulāciju un strauju rekombinantu oliešu sintēzi, kā arī citus priekšrocības. Izmantojot plašas modifikācijas, E. coli ir kļuvusi par ideālu izvēli oliešu izpausmē, kas veicinājusi dažādu inženieru E. coli šķirņu izstrādi.

Yaohai Bio-Pharma specializējas viena stunda pakalpojumu sniegšanā, kas ietver fermentāciju, tīrīšanu, formulēšanas procesa attīstību un ražošanu dažādu birofarmaceitisko vielu sērijām, izmantojot E. coli izpausmes sistēmas. Ņemot vērā Yaohai plašo pieredzi, mēs konstatējam, ka četri bieži izmantotie E. coli šķirnes tiek izmantotas rekombinantu oliešu ražošanai un norādām to īpatnības.

BL 21 šķirne

Iegūta no E. coli B linijas, BL21 štrālveida trūkst Lon proteāze un ārējā membrānas proteāze OmpT. Lon proteāze galvenokārt degradē ārējus olbaltumus, savukārt OmpT galvenokārt degradē ārējo matricu olbaltumus. Šo divu galveno proteāzu trūkums var efektīvi novērst rekombinantu olbaltumu degradāciju.

Origami štrālveida

Origami štrālveida, kas ir E. coli K-12 atvasinājums, satur mutācijas tioriedoksīna reductāzē un glutationa reductāzē, kas ļauj veidot pareizi savilktus olbaltumus, kas satur disulfīda saites, un uzlabo olbaltumu risināmību. Origami štrālveida, ieskaitot Origami, Origami 2 un Origami B, ir piemērotas aktīvu olbaltumu ar disulfīda saitēm izpausēšanai.

SHuffle štrālveida

SHuffle štrāta konstitūtīvi izsauca disulfīda ikizomēzu DsbC citoplazmā, veicinot pareizo disulfīda saites formēšanos oksidētajos olbaltumos. Tas arī darbojas kā molekularais chaperons olbaltumu savilcienam, palīdzot formēt pareizo konformitāti.

Rosetta štrāts

Rosetta štrāts papildina E. coli ar tRNA, kas atbilst retiem kodoniem, mēģinot uzlabot exogēnu gēnu izteiksmes līmeni, īpaši eukariotisku gēnu, prokariotiskajos sistēmās. To iegūst no BL21 un nes chloramfenikola resistenta pRARE plazmidu, kas papildina sešus tRNA, kas atbilst retiem kodoniem (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC un GGA), kas sākotnēji bija trūkums E. coli, nodrošinot 'universālu' olbaltumu izteicienu.

Secinājums

Trīs galvenās veiktspējas rekombinantu oliecīnu ražošanai ir dzimums, vektors un kultūras apstākļi. Atkarībā no fizikālo un kimisko īpašību sapratnes attiecībā uz rekombinanto oliecīnu, katras cepures un eksperimenta specifiskajiem prasībām jāizvēlas vispiemērotākais dzimums. Turklāt jāoptimizē arī faktori, piemēram, plazmīdu vektori, temperatūra un inducenti, lai palielinātu oliecīnu izpausmi.

Yaohai Bio-Pharma arī aktīvi meklē pasaules līmenī iestāžu vai personiskus partnerus, piedāvājot visaugstāko atalgojumu no_brīvās_tirgus. Ja jums ir kādi jautājumi, lūdzu, nekavējoties sazinieties ar mums: [email protected]