Inovatīvas montāžas metodes liela mēroga gēnu sintēzei

Montāžas tehnoloģija lielu DNS fragmentu sintezēšanai no nulles ir gēnu sintēzes stūrakmens, kas ietver tādas metodes kā BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson montāža, CPEC un Overlap PCR. Sakarā ar pašreizējās tehnoloģijas ierobežojumiem, precīzi sintezējot gēna garuma DNS vienā solī, ir nepieciešams apvienot in vitro un in vivo montāžas metodes, lai segmentos sintezētos oligonukleotīdu fragmentus apkopotu garos DNS fragmentos.

In vitro montāžas metodes

Tie ir klasificēti dažādās metodēs, pamatojoties uz fragmentu lielumu un secības īpašībām, un ir kopīga prasība izmantot rīku fermentus. Pārklāšanās PCR, kuras pamatā ir DNS polimerāzes metode, ir vienkārša un ātra. BioBrick un BglBrick metodes, kas balstās uz izoshizomeriem, nodrošina standartizētu montāžu, lai gan BioBrick metode nav piemērota saplūšanas proteīniem. Golden Gate klonēšanas metode, kuras pamatā ir IIS tipa restrikcijas enzīmi, ļauj efektīvi bezšuvju ligēt vairākus fragmentus. Gibsona montāžas metode, kas izmanto vairāku instrumentu enzīmu kombināciju, nodrošina netraucētu ligāciju ar fragmentu izmēriem, kas sasniedz vairākus simtus kb. Standartizētais DNS komponentu dizains uzlabo esošo fragmentu izmantošanas līmeni.

In vivo montāžas metodes

Kaut gan in vitro samontētie fragmenti var sasniegt vairākus simtus kb lielumu, raža bieži vien ir nepietiekama, tādēļ ir nepieciešama pastiprināšana, izmantojot tādus organismus kā Escherichia coli. Saliekot fragmentus, kas pārsniedz 20 kb, bieži tiek izmantotas rekombinantās sistēmas organismos, tostarp Bacillus subtilis, raugs un inženierijas baktērijas. Raugs kā plaši izmantots saimnieks jau daudzus gadus ir atzīts par savu efektīvo homologās rekombinācijas spēju. To var izmantot, lai saliktu mākslīgās hromosomas līdz vairākām megabāzēm (Mb) garumā. Turklāt Saccharomyces cerevisiae piemīt ārkārtēja tolerance pret hromosomu garumu, nodrošinot teorētisku pamatu rauga izmantošanai, lai izveidotu īpaši garas hromosomas augstākos organismos.

Aplikācijas

Yaohai Bio-Pharma galvenokārt izmanto divas gēnu sintēzes montāžas metodes: ligāzes montāžu un DNS polimerāzes montāžu. Ligāzes montāžas metode savieno pārklājošos un hibridizētos 5'-fosforilētos oligonukleotīdu fragmentus divpavedienu DNS, izmantojot DNS ligāzi. Polimerāzes montāžas metode izmanto DNS polimerāzi, lai paplašinātu pārklājošos oligonukleotīdu fragmentus, izmantojot hibridizāciju, iegūstot dažāda garuma maisījumu un visbeidzot pastiprinot veiksmīgi samontētos pilna garuma fragmentus, izmantojot primerus. Yaohai's var palīdzēt klientiem apmierināt īpašas prasības gēnu sintēzē.

Mēs arī aktīvi meklējam institucionālus vai individuālus globālus partnerus. Mēs piedāvājam konkurētspējīgāko atalgojumu nozarē. Ja jums ir kādi jautājumi, lūdzu, sazinieties ar mums: [email protected]