Inovatīvas sastādīšanas metodes lielapjoma gēnu sintezei

Tehnoloģija, kas izmantošana lielu DNA fragmentu sintēzei no sākuma, ir gēnu sintēzes pamatā, ietverot metodes, piemēram, BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson montāžu, CPEC un Overlap PCR. Daudzveidības dēļ, ka pašreizējā tehnoloģija nav spējīga precīzi sintetizēt gēnu garumā DNA vienā posmā, ir nepieciešams kombinēt in vitro un in vivo montāžas tehnikas, lai sastādītu oligonukleotīdu fragmentus, sintetizētus daļēji, ilgākiem DNA fragmentiem.

In vitro montāžas tehnikas

Tie tiek klasificēti dažādos veidos, pamatojoties uz fragmenta lielumu un sekvenes īpatnībām, ar kopēju prasību izmantot rīku enzīmus. Overlap PCR, balstoties uz DNA polimerāze metodi, ir vienkāršs un straujš darbībā. BioBrick un BglBrick metodes, kas balstās uz izoschizomu izmantošanu, ļauj standartizētu montāžu, tomēr BioBrick metode nav piemērota proteīnu saplūdes konstruktam. Golden Gate klonēšanas metode, kas balstās uz tipa IIS ierobežojošo enzīmu, ļauj efektīvu bez zīmju vairāku fragmentu savienošanu. Gibson montāžas metode, kas izmanto dažādu rīku enzīmu kombināciju, ļauj bez zīmju savienošanu, kur fragmenta lielums var sasniegt vairākus simtus kb. Standartizēts DNA komponentu dizains palielina esošo fragmentu izmantošanas efektivitāti.

In vivo montāžas tehnoloģijas

Tomēr in vitro savienotie fragmenti var sasniegt vairākus simtus kb lielumā, tomēr ražots bieži vien ir nepietiekams, kas prasa amplifikāciju, izmantojot organismus, piemēram, Escherichia coli. Sastādot fragmentus, kas pārsniedz 20 kb, bieži tiek izmantoti rekombinācijas sistēmas organismos, tostarp Bacillus subtilis, griezīte un modificētas baktērijas. Griezīte kā parastais māksliniecisks dzīvnieks jau ilgu laiku ir pazīstama ar savu efektīvo homologu rekombinācijas spēju. To var izmantot, lai sastādītu sintētiskus hromosomas līdz vairākiem megabazēm (Mb) garumā. Turklāt Saccharomyces cerevisiae parāda neobykšņu toleranci pret hromosomu garumu, nodrošinot teorētisko pamatu griezītes izmantošanai, lai konstruētu superilgus hromosomas augstākos organismos.

Lietojumi

Yaohai Bio-Pharma galvenokārt izmanto divas montāžas metodes gēnu sintēzei: ligazas montāžu un DNS polimerēzes montāžu. Ligazas montāžas metode savieno 5'-fosfātētas oligonukleotīdu fragmentus, kas pārklājas un hibridizējas, veidojot divvietu DNS ar DNS ligazu palīdzību. Polimerēzes montāžas metode izmanto DNS polimerēzi, lai paplašinātu pārklājošos olignonukleotīdu fragmentus caur hibridizāciju, iegūstot dažādās garumās maiņas, un beidzot amplificētu veiksmīgi sastādītos pilngarumos fragmentus, izmantojot primers. Yaohai var palīdzēt klientiem apmierināt specifiskās prasības gēnu sintēzei.

Mēs aktīvi meklējam globālus partnerus, gan iestāžu, gan personīgu līmenī. Mēs piedāvājam nozīmē spēcīgāko atalgojumu. Ja jums ir jebkādas jautājumi, lūdzu, nerozdomājiet mūs sazināties: [email protected]