Championing Reporter RNS modifikācijas metodes

Izvēloties, kura reportiera mRNS modifikāciju metode ir vēlama, nav viennozīmīgas atbildes, jo katrai metodei un reportiera gēnam ir savas priekšrocības un piemērojamie scenāriji. Šeit ir dažas izplatītas mRNS modifikācijas metodes un reportieru gēni, kā arī to īpašības un piemērotība.

mRNS modifikācijas metodes

Metilēšana:

1. m6A: Saistīts ar mRNS stabilitāti, savienošanu, translāciju un miRNS apstrādi. Atklāšanas izaicinājumi ietver antivielu atlasi un lokalizāciju.
2. 5' Cap Nm: uzlabo stabilitāti, savienošanu, poliadenilāciju un kodolenerģijas eksportu. Palīdz atšķirt paš-RNS no svešās RNS.
3. Pseidouridilācija: Maina kodonus, uzlabo stabilitāti un reaģē uz stresu. Katalizē pseidouridīna sintāzes.

Nedabisko nukleotīdu ievads:

1. Ieviests transkripcijas laikā ar dubultās ķīmiskās modifikācijas stratēģiju. Tas uzlabo stabilitāti, efektivitāti un olbaltumvielu ekspresiju.

Reportieris Genes

1. Zaļā fluorescējošā proteīna gēns (GFP): Priekšrocības: Viegli nosakāms, stabilas fluorescences īpašības, nav toksisks šūnām, piemērots dzīvu šūnu attēlveidošanai. Trūkumi: ierobežota fluorescences intensitāte.
2. Uzlabots zaļais fluorescējošais proteīns (eGFP): Priekšrocības: Vairāk nekā 6 reizes spilgtāks nekā savvaļas tipa GFP, padarot to piemērotāku kā reportiera gēnu gēnu ekspresijas, regulēšanas, šūnu diferenciācijas un olbaltumvielu lokalizācijas un transportēšanas pētīšanai organismos.
3. Sarkanie fluorescējošie proteīni (piemēram, mCherry): Priekšrocības: garāki ierosmes un emisijas viļņu garumi, kā rezultātā intracelulārās attēlveidošanas laikā ir zemāks fons, lielisks fluorescences spilgtums un fotostabilitāte, kā arī zemāka šūnu toksicitāte. Trūkumi: noteiktos eksperimenta apstākļos var nebūt tik plaši izmantots kā GFP.
4. Firefly luciferāze: Priekšrocības: ATP, magnija jonu un skābekļa klātbūtnē tas var katalizēt luciferīna oksidēšanos par oksiluciferīnu, izstarojot bioluminiscenci. Tas ir piemērots lietošanai kā kontrole, lai pētītu mērķa gēnu translācijas efektivitāti zīdītāju šūnās, šūnu dzīvotspēju un in vivo attēlveidošanas testus.

Secinājumi

Izvēloties, kura reportiera mRNS modifikāciju metode ir vēlama, tā ir atkarīga no konkrētiem eksperimenta mērķiem, izpētes fona un eksperimenta apstākļiem. Piemēram, ja ir nepieciešama augsta jutība, eGFP var būt labāka izvēle. Ja, lai samazinātu fona traucējumus, ir nepieciešama attēlveidošana garākos viļņu garumos, sarkani fluorescējoši proteīni, piemēram, mCherry, var būt piemērotāki. Turklāt, pamatojoties uz specifiskām mRNS modifikācijas vajadzībām (piemēram, stabilitātes uzlabošana, translācijas efektivitātes uzlabošana), var izvēlēties atbilstošo modifikācijas metodi.

Kā pirmais un lielākais mikrobu bioloģiskais CRDMO Lielajā Ķīnā, Yaohai Bio-Pharma piedāvā visaptverošus vienas pieturas risinājumus vai atsevišķus pakalpojumus, sākot no RNS sintēzes, celmu inženierijas un būvniecības, augšupējas un pakārtotas procesu izstrādes līdz GMP vai ne. - GMP līmeņa zāļu vielu ražošana un aizpildīšanas un apdares pakalpojumi dažādām metodēm, piemēram, mRNS, cirRNS, plazmīdu RNS, rekombinantā olbaltumvielas, peptīdi, fermenti, viena domēna antivielas un VLP lietošanai cilvēkiem un veterināriem.

Yaohai Bio-Pharma arī aktīvi meklē institucionālus vai individuālus globālus partnerus un piedāvā viskonkurētspējīgāko atlīdzību nozarē. Ja jums ir kādi jautājumi, lūdzu, sazinieties ar mums: [email protected]