再合成ヒトインスリンの精製プロセスの最適化

近年、糖尿病患者の増加によりインスリンの需要が高まっていますが、安価なインスリンは供給が不足しています。効率的かつ経済的なインスリン生産は非常に重要です。主にエシェリヒア・コリ（E. coli）やイーストを用いて生産されますが、これは急速な成長と低コストによるものです。しかし、E. coliでは複雑な後工程処理が必要です。

後工程処理の概要：

E. coliの包含体から再組合せ人間インスリンを精製するには、回収、洗浄、溶解化および酸化、切断、バッファー交換、クロマトグラフィーによる精製、沈殿、再構造化、酵素による切断、そして配合といった複数のステップが含まれます。

ヤオハイ・バイオ・ファーマは、再組合せインスリンの生産と精製において広範な経験を持ち、専門家のチームによって、あなたのインスリン生産を高い効率で完了させることができます。数百件のプロジェクトでの経験に基づき、ヤオハイは再組合せ人間インスリンの後工程精製プロセスを最適化する方法についてまとめています。

インクルージョンボディの回収と洗浄:

細胞は機械的方法（超音波、高圧ホモジナイゼーションなど）またはリゾチーム処理によって破壊され、その後、尿素やトリトンX-100などを含む洗浄バッファーで不純物を除去します。洗浄中には、コストを抑える一方でタンパク質の品質を確保するためにパラメータを最適化する必要があります。

インクルージョンボディの可溶化と酸化:

グアニジン塩酸塩や尿素などの高濃度変性剤を使用してインクルージョンボディを可溶化し、不正な二硫化結合の形成を防ぐために二硫化チオトレイトまたはβ-メルカプトエタノールが添加されます。pHおよび温度は、可溶化および酸化反応に大きな影響を与えます。

切断とバッファー交換:

シアノゲン臭化物による切断は、N末端の開始アミノ酸を取り除くために使用されますが、毒性や低特異性の問題があります。透析、ウルトラフィルトレーション、またはサイズ排阻クロマトグラフィーを通じて、バッファー交換はその後の操作のために有害な試薬を除去します。

クロマトグラフィーによる精製と沈殿：

アフィニティクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、疎水的相互作用クロマトグラフィー、サイズ排阻クロマトグラフィーなどの複数のクロマトグラフィー技術がインスリンの精製に使用されます。pH沈殿や亜鉛結晶化などの沈殿法は、不純物を除去し、タンパク質を濃縮するために使用されます。

再天然化：

溶解されたタンパク質は、再天然化バッファーで希釈され、二硫化結合の正しい形成とタンパク質の折り畳みを促進します。タンパク質の折り畳み液クロマトグラフィーや透析もまた、再天然化に使用される方法です。

酵素による切断と配合：

トripsinおよびカルボキシペプチダーゼBは、Cペプチドを切断し、活性インスリンヘテロ二量体を形成するために使用されます。最後に、結晶化とリヨピフィケーションが用いられ、残留塩類やバッファを除去して安定した製剤が準備されます。異なる臨床的ニーズに対応するために、特定の添加物（例えば亜鉛やプロタミン）が添加されます。

結論：

インスリンの下流工程処理は E. coli 複雑です。今後の焦点は、需要に応えコストを削減するために、これらのステップを最適化し、効率的で経済的な生産を行うことです。

ヤオハイ・バイオファーマは、また積極的に世界的な機関や個人のパートナーを求め、業界で最も競争力のある報酬を提供しています。ご質問がある場合は、お気軽にお問い合わせください： BD@yaohaibio.cn