Controllo di qualità e applicazioni delle proteine ​​ricombinanti

Il controllo di qualità delle proteine ​​ricombinanti è fondamentale per l'affidabilità e la riproducibilità dei dati sperimentali. Ogni fase, dalla progettazione del progetto al processo di produzione, richiede rigorose strategie di controllo di qualità.

Strategie di controllo qualità

Il settore industriale aderisce a rigide procedure operative standard, mentre la comunità accademica ha bisogno di migliorare la conoscenza professionale per migliorare la riproducibilità dei dati. Le proteine ​​con applicazioni biologiche specifiche o caratteristiche biochimiche richiedono strategie di controllo qualità (QC) su misura.

Esempi e soluzioni impegnativi

Yaohai Bio-Pharma vanta una vasta esperienza nella produzione e purificazione di proteine ​​ricombinanti, unita a un team di esperti, assicurando che la produzione di proteine ​​venga completata con elevata purezza. Sfruttando la nostra esperienza in centinaia di progetti, Yaohai riassume gentilmente come ottimizzare la purificazione delle proteine.

Proteine ​​che legano gli acidi nucleici: Sono necessarie fasi di rimozione degli acidi nucleici, come nucleasi o precipitazione PEI. Il rapporto A260nm/A280nm viene monitorato per rilevare la contaminazione degli acidi nucleici.

Catena pesante 1 della ferritina del topo per crio-EM: È necessario ottimizzare le fasi di purificazione e aggiungere nucleasi per ridurre il rapporto A260nm/A280nm e garantire la purezza delle proteine.

Proteina chimerica dsRBEC umana: La lisi cellulare utilizza un tampone contenente urea, seguito dal ripiegamento in colonna per ottenere proteine ​​funzionalmente attive.

Proteine ​​che legano cationi bivalenti: Durante l'espressione e la purificazione devono essere aggiunti specifici cationi bivalenti e si devono evitare agenti chelanti.

Proteine ​​ferro-zolfo: L'imidazolo dovrebbe essere evitato per prevenire l'interruzione del cluster [2Fe ± 2S], assicurando il corretto ripiegamento e funzionamento delle proteine.

Frammento solubile di LLT1: Il design mutante ottimizza la formazione del legame disolfuro e il ripiegamento delle proteine, dando origine a proteine ​​stabili e ad alta resa.

Cristallizzazione della chinasi CLK1: La coespressione con λ-fosfatasi rimuove i fosfati dai siti di fosforilazione, mentre la cromatografia ad esclusione dimensionale (SEC) e la cromatografia a scambio anionico vengono utilizzate per ottenere CLK1 omogeneo senza fosforilazione eterogenea.

Proteine ​​per uso antigenico: La valutazione della purezza è necessaria per evitare la contaminazione con proteine ​​altamente immunogeniche. Per gli anticorpi epitopi strutturali, la conformazione tridimensionale dell'antigene deve essere mantenuta.

Proteine ​​soggette ad aggregazione: Per limitare i problemi di aggregazione vengono impiegate strategie quali lo screening di diversi ceppi e l'abbassamento delle temperature di coltura; inoltre, vengono progettate strategie di purificazione rapida.

Rimozione dell'endotossina: Metodi come la cromatografia a carica positiva e la cromatografia di affinità con leganti policationici rimuovono le endotossine, garantendo che i livelli di LPS siano al di sotto dei limiti di applicazione.

Complessi proteici: Le subunità sono espresse separatamente e assemblate in vitro o co-espresse per formare complessi funzionali. L'integrità del complesso è valutata dall'omogeneità e dalla massa molare.

Conclusione

La produzione di proteine ​​inizia con una progettazione strategica, tenendo conto delle caratteristiche biochimiche e delle applicazioni. Durante l'espressione, la purificazione e il controllo di qualità, le condizioni e i metodi sono ottimizzati per stabilità, non aggregazione e stato nativo. Le proteine ​​purificate servono a vari usi a valle, come la caratterizzazione biofisica.

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