Plasmide: Un Piccolo Molecola Circolare di DNA con Grande Potenziale

I plasmidi, piccole molecole circolari di DNA, fungono da vettori essenziali per la ricombinazione del DNA nella ricerca di biologia molecolare e nella terapia genica. Il rendimento e la qualità dei plasmidi sono cruciali, con la proporzione di superavvolgimenti e il contenuto di endotossine come due fattori significativi che influiscono sulla qualità del plasmide.

Sottotipi di Plasmidi

I plasmidi estratti da Escherichia coli (E. coli) esistono in vari sottotipi: forma superavvolta (SC), circolare aperta (OC) e lineare (L) (Figura 1). Tra questi, i plasmidi superavvolti mostrano una grande stabilità, antigenicità e alta efficienza di trasfusione ed espressione.

Figura 1. Diagramma schemático dei comuni sottotipi di plasmidi

Nella elettroforesi su gel di agarosio del DNA plasmidiale, l'ordine di velocità di migrazione è DNA superavvolto, DNA lineare e DNA circolare aperto (Figura 2).

Figura 2. Schema della migrazione nell'elettroforesi su gel di agarosio dei diversi sottotipi di plasmidi

Yaohai Bio-Pharma ha continuamente migliorato i propri processi e tecniche per garantire che la proporzione di sovravvolgimenti dei plasmidi di grado trasfettivo sia ≥85% e quella dei plasmidi di grado sperimentale sia ≥50%. Di seguito è riportato un caso dimostrativo (Figura 3), in cui l'elettroforesi su gel di agarosio viene combinata con il software Gel-Pro Analyzer per rilevare la proporzione di sovravvolgimenti.

Figura 3. Risultati del controllo qualità della proporzione di sovravvolgimenti dei plasmidi

Endotossina

L'endotossina, componente del muro cellulare dei batteri Gram-negativi, ha come componente tossico principale il lipopolisaccaride A (LPS-A). Durante l'estrazione dei plasmidi, l'endotossina viene rilasciata nella soluzione di lisi, influenzando gravemente l'efficienza della trasfessione dei plasmidi nelle cellule. Inoltre, può attivare risposte immunitarie non specifiche nelle cellule, causando falsi positivi negli esperimenti.

Yaohai Bio-Pharma adotta un approccio di "non introduzione" e "alta rimozione", controllando rigorosamente l'uso di reagenti e materiali contenenti endotossina durante tutto il processo di purificazione. L'azienda ha inoltre sviluppato un metodo efficiente per la rimozione dell'endotossina, offrendo tre livelli di contenuto di endotossina: ≤0.1 EU/µg, ≤0.01 EU/µg e ≤0.005 EU/µg.

Yaohai Bio-Pharma dispone di una linea di servizio di estrazione di plasmidi ad alta portata, in grado di consegnare 1 mg di plasmidi estratti in un tempo record di una settimana. Di default, fornisce più di sette test di controllo qualità (QC) per garantire la consegna di plasmidi di alta qualità e standard elevati da diverse prospettive.

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