Plasmide: una piccola molecola circolare di DNA con un grande potenziale

I plasmidi, piccole molecole circolari di DNA, servono come vettori essenziali per la ricombinazione del DNA nella ricerca di biologia molecolare e nella terapia genica. La resa e la qualità dei plasmidi sono cruciali, con la proporzione superavvolta e il contenuto di endotossine come due fattori significativi che influenzano la qualità del plasmide.

Sottotipi di plasmidi

I plasmidi estratti da Escherichia coli (E. coli) esistono in vari sottotipi: forme superavvolte (SC), circolari aperte (OC) e lineari (L) (Figura 1). Tra questi, i plasmidi superavvolti mostrano eccellente stabilità, antigenicità e alta efficienza di trasfezione ed espressione.

Figura 1. Diagramma schematico dei sottotipi comuni dei plasmidi

Nell'elettroforesi su gel di agarosio del DNA plasmidico, l'ordine della velocità di migrazione è DNA superavvolto, DNA lineare e DNA circolare aperto (Figura 2).

Figura 2. Modello di migrazione dell'elettroforesi su gel di agarosio di diversi sottotipi di plasmidi

Yaohai Bio-Pharma ha costantemente migliorato i suoi processi e le sue tecniche per garantire che la proporzione superavvolta dei plasmidi di grado di trasfezione sia ≥85% e quella dei plasmidi di grado di ricerca sia ≥50%. Di seguito è riportato un caso dimostrativo (Figura 3), in cui l'elettroforesi su gel di agarosio è combinata con il software Gel-Pro Analyzer per rilevare la proporzione superavvolta.

Figura 3. Risultati dell'ispezione di qualità della proporzione superavvolta del plasmide

endotossina

L'endotossina, un componente della parete cellulare dei batteri Gram-negativi, è costituita principalmente da lipopolisaccaride A (LPS-A) come componente tossico. Durante l'estrazione del plasmide, l'endotossina viene rilasciata nella soluzione di lisi, influenzando gravemente l'efficienza della trasfezione del plasmide nelle cellule. Inoltre, può attivare risposte immunitarie non specifiche nelle cellule, portando a falsi positivi negli esperimenti.

Yaohai Bio-Pharma adotta un approccio di "non introduzione" e "rimozione elevata", controllando rigorosamente l'uso di reagenti e materiali contenenti endotossina durante tutto il processo di purificazione. L'azienda ha anche sviluppato un metodo efficiente di rimozione dell'endotossina, offrendo tre livelli di contenuto di endotossina: ≤0.1 EU/µg, ≤0.01 EU/µg e ≤0.005 EU/µg.

Yaohai Bio-Pharma possiede una linea di servizi di estrazione di plasmidi ad alta produttività, in grado di fornire 1 mg di plasmidi estratti in appena una settimana. Di default, fornisce più di sette test di controllo qualità (QC) per garantire la fornitura di plasmidi di alta qualità e di alto livello da più prospettive.

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