Produzione di Antibodi Monoclonaux in E. coli: Progressi e Prospettive
Gli anticorpi monoclonali (mAbs), che sono glicoproteine solubili di circa 150 kDa costituite da catene pesanti e leggere, vengono ampiamente utilizzati nel trattamento dei tumori e delle malattie autoimmune. Negli ultimi anni, i metodi di produzione dei mAbs e delle loro derivate sono diventati diversificati, con Escherichia coli ( E. coli ) che si sta affermando come un importante ospite per la produzione di frammenti di anticorpi.
Nella produzione di mAbs, Yaohai Bio-Pharma si distingue grazie alla sua ricca esperienza in Ricerca e Sviluppo. Con una piattaforma matura, attrezzature avanzate e una tecnologia di espressione ecologica innovativa, Yaohai offre servizi integrati dalla costruzione del banco cellulare al fill&finish, personalizzando completamente i mAbs per i clienti.
Metodi di produzione dei mAbs in E. coli
E. coli offre crescita rapida, costi bassi, facilità di manipolazione e flessibilità nell'espressione all'interno del citoplasma, periplasma o mezzo di coltura. In E. coli, la produzione di anticorpi è principalmente classificata in produzione periplasmica, citoplasmatica, semiossidata citoplasmatica e sistemi di sintesi proteica cellulare (CFPS). La produzione periplasmatica ha raggiunto alti rendimenti di immunoglobulina G funzionale a lunga durata (FL-IgG) attraverso un equilibrio ottimizzato di espressione e secrezione. La produzione citoplasmatica incontra sfide a causa dell'ambiente riducente, ma FL-IgG funzionale è stato espresso con successo ingegnerizzando ceppi per creare un ambiente ossidativo. Il sistema CFPS ha raggiunto una produzione efficiente di anticorpi regolando le regioni di inizio della traduzione e aggiungendo proteine chaperon.
Caratterizzazione degli anticorpi e controllo qualità
Il controllo della qualità degli anticorpi include caratterizzazioni biochimiche, biofisiche e biologiche. La caratterizzazione biochimica analizza la struttura, la sequenza e la glicosilazione degli anticorpi, tra le altre cose. La caratterizzazione biofisica valuta l'omogeneità, la solubilità e la stabilità. La caratterizzazione biologica valida la bioattività dell'anticorpo, inclusi ADCC e CDC, tra gli altri. Sebbene gli anticorpi deglicosilati prodotti in E. coli manchino di alcune funzioni effettore del dominio Fc, studi hanno dimostrato che la loro stabilità è simile a quella degli anticorpi glicosilati e mostrano una similarità terapeutica efficace sotto condizioni testate.
Per ripristinare o migliorare gli effetti immunitari degli anticorpi deglicosilati, i domini Fc possono essere ingegnerizzati. Ad esempio, possono essere selezionati mutanti che si legano a FcɣRI per migliorare la funzione effettore ADCC. Questi anticorpi ingegnerizzati dimostrano significativi effetti biologici e potenziale terapeutico sia in vitro che in vivo.
Conclusione
In sintesi, la produzione di anticorpi deglicosilati in E. coli ha fatto passi importanti nel campo della produzione di anticorpi, riducendo i costi e migliorando la qualità. Sebbene manchino alcune funzioni effettore del dominio Fc, attraverso un progetto di ingegnerizzazione mostrano funzioni effettore potenziate e potenziale terapeutico. Si prevede che più anticorpi deglicosilati prodotti in E. coli entreranno in studi clinici in futuro.
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