Esplora il Fascinante Mondo della Precipitazione del Cloruro di Litio

La precipitazione di cloruro di litio è ampiamente utilizzata per separare l'RNA dalla soluzione.

Ecco la suddivisione del processo:

1. Preparazione del campione: Inizia con un campione contenente RNA, ad esempio in-vitro miscela di trascritti.

2. Aggiunta di cloruro di litio: Aggiungi un volume appropriato di soluzione concentrata di cloruro di litio alla soluzione di RNA.

3. Incubazione: Dopo aver aggiunto il cloruro di litio, la soluzione viene incubata a bassa temperatura, generalmente intorno a -20°C. Ciò provoca la precipitazione delle molecole di RNA dalla soluzione.

4. Centrifugazione: Dopo l'incubazione, la soluzione viene centrifugata ad alta velocità. Questo separa l'RNA precipitato dal resto della soluzione, che contiene impurità.

5. Lavaggio: Una volta completata la centrifugazione, rimuovi attentamente il sopranatante senza interferire con la precipitazione dell'RNA. Lava le particelle di RNA con etanolo o isopropanolo freddo per rimuovere eventuali impurità residue.

6. Risospensione RNA: Dopo la lavatura, il precipitato di RNA viene asciugato brevemente all'aria e quindi risospeso in un tampone appropriato, come il tampone TE (tampone Tris-EDTA) o acqua distillata. Potrebbe essere necessario un pipettaggio delicato o correnti vorticose per risospingere adeguatamente l'RNA.

7. Quantificazione e analisi: Infine, l'RNA isolato viene quantificato mediante spettrofotometria ultravioletta o metodo di fluorescenza. Questo determina la concentrazione e la purezza del campione di RNA, che è importante per applicazioni successive come l'incapsulamento LNP e la trasfusione cellulare.

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