Esplora l'affascinante mondo della precipitazione del cloruro di litio

La precipitazione del cloruro di litio è ampiamente utilizzata per separare l'RNA dalla soluzione.

Ecco la ripartizione del processo:

1. Preparazione del campione: iniziare con un campione contenente RNA, come in-vitro miscela di trascrizione.

2. Aggiunta di cloruro di litio: aggiungere un volume appropriato di soluzione concentrata di cloruro di litio alla soluzione di RNA.

3. Incubazione: dopo l'aggiunta di cloruro di litio, la soluzione viene incubata a bassa temperatura, generalmente intorno a -20°C. Ciò provoca la precipitazione delle molecole di RNA dalla soluzione.

4. Centrifugazione: dopo l'incubazione, la soluzione viene centrifugata ad alta velocità. Ciò separa l'RNA precipitato dal resto della soluzione, che contiene impurità.

5. Lavaggio: una volta completata la centrifugazione, rimuovere con attenzione il surnatante ma senza interferire con la precipitazione dell'RNA. Lavare le particelle di RNA con etanolo freddo o alcol isopropilico per rimuovere eventuali impurità rimanenti.

6. Risospensione dell'RNA: dopo il lavaggio, il precipitato di RNA viene brevemente essiccato all'aria e poi risospeso in un tampone appropriato, come il tampone TE (tampone Tris-EDTA) o acqua distillata. Potrebbero essere necessarie pipettature delicate o correnti parassite per risospendere adeguatamente l'RNA.

7. Quantificazione e analisi: Infine, l'RNA isolato viene quantificato tramite spettroscopia ultravioletta o metodo di fluorescenza. Ciò determina la concentrazione e la purezza del campione di RNA, che è importante per applicazioni downstream come l'incapsulamento LNP e la trasfezione cellulare.

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