Découvrez le Fascinant Monde de la Précipitation au Chlorure de Lithium

La précipitation de chlorure de lithium est largement utilisée pour séparer l'ARN de la solution.

Voici le détail du processus :

1. Préparation de l'échantillon : Commencez par un échantillon contenant de l'ARN, comme un mélange de in vitro transcription.

2. Ajout de chlorure de lithium : Ajoutez un volume approprié de solution concentrée de chlorure de lithium à la solution d'ARN.

3. Incubation : Après avoir ajouté le chlorure de lithium, la solution est incubée à basse température, généralement autour de -20°C. Cela provoque la précipitation des molécules d'ARN hors de la solution.

4. Centrifugation : Après l'incubation, la solution est centrifugée à grande vitesse. Cela sépare l'ARN précipité du reste de la solution, qui contient des impuretés.

5. Lavage : Une fois la centrifugation terminée, retirez soigneusement le surnageant sans interférer avec la précipitation d'ARN. Lavez les particules d'ARN avec de l'éthanol ou de l'alcool isopropylique froid pour éliminer toute impureté restante.

6. Ré-suspension de l'ARN : Après le lavage, le précipité d'ARN est brièvement séché à l'air puis ré-dissous dans un tampon approprié, tel que le tampon TE (tampon Tris-EDTA) ou de l'eau distillée. Un pipetage doux ou des courants tourbillonnaires peuvent être nécessaires pour ré-suspendre correctement l'ARN.

7. Quantification et analyse : Enfin, l'ARN isolé est quantifié par spectroscopie ultraviolette ou méthode de fluorescence. Cela détermine la concentration et la pureté de l'échantillon d'ARN, ce qui est important pour les applications downstream comme l'encapsulation en LNP et la transfection cellulaire.

Yaohai Bio-Pharma maîtrise l'utilisation de la méthode de précipitation au chlorure de lithium dans le processus de production car elle est simple, peu coûteuse et produit un ARN de haute qualité adapté à diverses applications en biologie moléculaire. Cependant, il est important d'optimiser les conditions (par exemple, la concentration en chlorure de lithium, le temps d'incubation, la vitesse de centrifugation) pour obtenir les meilleurs résultats pour un échantillon particulier.

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