Explorez le monde fascinant des précipitations de chlorure de lithium

La précipitation au chlorure de lithium est largement utilisée pour séparer l’ARN de la solution.

Voici la répartition du processus :

1. Préparation de l'échantillon : Commencez avec un échantillon contenant de l'ARN, tel que in vitro mélange de transcription.

2. Ajout de chlorure de lithium : ajoutez un volume approprié de solution concentrée de chlorure de lithium à la solution d'ARN.

3. Incubation : après l'ajout de chlorure de lithium, la solution est incubée à basse température, généralement autour de -20°C. Cela provoque la précipitation des molécules d'ARN hors de la solution.

4. Centrifugation : Après incubation, la solution est centrifugée à grande vitesse. Cela permet de séparer l'ARN précipité du reste de la solution, qui contient des impuretés.

5. Lavage : une fois la centrifugation terminée, retirez soigneusement le surnageant mais sans interférer avec la précipitation de l'ARN. Lavez les particules d'ARN avec de l'éthanol froid ou de l'alcool isopropylique pour éliminer les impuretés restantes.

6. Remise en suspension de l'ARN : après le lavage, le précipité d'ARN est brièvement séché à l'air libre, puis remis en suspension dans un tampon approprié, tel qu'un tampon TE (tampon Tris-EDTA) ou de l'eau distillée. Un pipetage doux ou des courants de Foucault peuvent être nécessaires pour remettre en suspension l'ARN de manière adéquate.

7. Quantification et analyse : Enfin, l'ARN isolé est quantifié par spectroscopie ultraviolette ou par méthode de fluorescence. Cela permet de déterminer la concentration et la pureté de l'échantillon d'ARN, ce qui est important pour les applications en aval telles que l'encapsulation de LNP et la transfection cellulaire.

Yaohai Bio-Pharma maîtrise parfaitement la méthode de précipitation au chlorure de lithium dans le processus de production, car elle est simple, peu coûteuse et produit de l'ARN de haute qualité adapté à diverses applications de biologie moléculaire. Cependant, il est important d'optimiser les conditions (par exemple, la concentration en chlorure de lithium, le temps d'incubation, la vitesse de centrifugation) pour obtenir les meilleurs résultats pour un échantillon particulier.

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