Promouvoir les méthodes de modification de l'ARN rapporteur

Il n'existe pas de réponse définitive au problème de choix de la méthode de modification de l'ARNm rapporteur, car chaque méthode et chaque gène rapporteur ont leurs propres avantages et scénarios applicables. Voici quelques méthodes courantes de modification de l'ARNm et des gènes rapporteurs, ainsi que leurs caractéristiques et leur adéquation.

Méthodes de modification de l'ARNm

Méthylation :

1. m6A: Associé à la stabilité de l'ARNm, à l'épissage, à la traduction et au traitement des miARN. Les défis de détection incluent la sélection et la localisation des anticorps.
2. 5' Cap Nm: Améliore la stabilité, l'épissage, la polyadénylation et l'exportation nucléaire. Aide à distinguer l'ARN propre de l'ARN étranger.
3. Pseudo-uridylation:Modifie les codons, améliore la stabilité et réagit au stress. Catalysé par les pseudouridines synthases.

Introduction de nucléotides non naturels :

1. Introduit lors de la transcription avec une stratégie de modification chimique double. Il améliore la stabilité, l'efficacité et l'expression des protéines.

Gènes rapporteurs

1. Gène de la protéine fluorescente verte (GFP): Avantages : Facile à détecter, propriétés de fluorescence stables, non toxique pour les cellules, adapté à l'imagerie de cellules vivantes. Inconvénients : Intensité de fluorescence limitée.
2. Protéine fluorescente verte améliorée (eGFP):Avantages : Plus de 6 fois plus lumineux que le GFP de type sauvage, ce qui le rend plus adapté comme gène rapporteur pour l'étude de l'expression des gènes, de la régulation, de la différenciation cellulaire et de la localisation et du transport des protéines au sein des organismes.
3. Protéines fluorescentes rouges (par exemple, mCherry): Avantages : Longueurs d'onde d'excitation et d'émission plus longues, entraînant un bruit de fond plus faible lors de l'imagerie intracellulaire, une excellente luminosité de fluorescence et une photostabilité et une toxicité cellulaire plus faible. Inconvénients : Peut ne pas être aussi couramment utilisé que le GFP dans certaines conditions expérimentales.
4. Luciferase de luciole:Avantages : En présence d'ATP, d'ions magnésium et d'oxygène, il peut catalyser l'oxydation de la luciférine en oxyluciférine, émettant une bioluminescence. Il convient à une utilisation comme contrôle pour étudier l'efficacité de la traduction des gènes cibles dans les cellules de mammifères, la viabilité cellulaire et les tests d'imagerie in vivo.

Pour aller plus loin

Le choix de la méthode de modification de l'ARNm rapporteur à privilégier dépend des objectifs expérimentaux spécifiques, des antécédents de recherche et des conditions expérimentales. Par exemple, si une sensibilité élevée est requise, l'eGFP peut être un meilleur choix. Si une imagerie à des longueurs d'onde plus longues est nécessaire pour réduire l'interférence de fond, les protéines fluorescentes rouges comme mCherry peuvent être plus adaptées. De plus, en fonction des besoins de modification spécifiques de l'ARNm (par exemple, l'amélioration de la stabilité, l'amélioration de l'efficacité de la traduction), la méthode de modification correspondante peut être sélectionnée.

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