Intégrité de l'ARNm
L’importance de l’analyse de l’intégrité de l’ARNm
Les ARNm sont reconnus pour leur instabilité inhérente et sont susceptibles de se fragmenter en présence de facteurs externes, en particulier lors des processus de transcription in vitro (IVT) et de purification, où les nucléases omniprésentes posent un défi. L'évaluation de l'intégrité de l'ARNm est cruciale dans le développement ultérieur de médicaments à base d'ARNm, garantissant à la fois la sécurité et la disponibilité des produits.
Yaohai-BioPharma fournit des services complets de tests d'intégrité de l'ARNm, employant des méthodes telles que l'électrophorèse sur gel d'agarose (AGE), l'électrophorèse capillaire (CEG) et la chromatographie liquide haute performance (HPLC), adhérant à des normes de qualité rigoureuses pour la recherche et les essais cliniques.
Exigences réglementaires pour l'intégrité de l'ARNm
Selon les considérations réglementaires de l’OMS, « l’intégrité de la structure de l’ARNm est considérée comme un attribut de qualité critique pour la libération de l’ARNm. Ainsi, un contrôle est nécessaire pour l’intégrité de l’ARNm, le pourcentage d’ARNm intact, le pourcentage de fragments d’ARNm, etc.
Méthode analytique
Analyse | Méthodologie |
Intégrité de l'ARNm | AGE, Agarosegélectrophorèse |
CGE,Électrophorèse capillaire |
CGE-LIF, Électrophorèse capillaire sur gel avec détection de fluorescence induite par la lumière |
Intégrité de l'ARNm par électrophorèse sur gel d'agarose
L'électrophorèse sur gel d'agarose est une technique largement utilisée pour évaluer l'intégrité de l'ARN total. Cela implique d’analyser l’échantillon d’ARN sur un gel d’agarose dénaturant, coloré soit au bromure d’éthidium, soit au SYBR Green. Le gel dénaturant, composé d'agarose, facilite la séparation des ARN en fonction de leur taille lorsqu'un courant électrique est appliqué. À mesure que l’ARN chargé négativement migre vers l’extrémité positive du gel, les fragments plus petits se déplacent plus rapidement, ce qui entraîne un tri des molécules d’ARN en fonction de leur taille.
Intégrité de l'ARNm par électrophorèse capillaire sur gel
L'électrophorèse capillaire sur gel (CGE) constitue une approche analytique à haute résolution essentielle pour évaluer l'intégrité des molécules d'ARN par longueur. Cette évaluation est importante pour l’assurance qualité, la compréhension de la puissance et l’optimisation des processus de fabrication. Semblable à l’électrophorèse sur gel d’agarose, la CGE utilise un courant électrique pour séparer les fragments d’ARN en fonction de leur charge et de leur taille. En CGE, un capillaire est rempli d’une matrice de gel de séparation infusée d’un colorant fluorescent. Le mouvement de l'ARN le long du capillaire dépend de sa taille et la détection est réalisée à l'aide de détecteurs ultraviolets (UV) ou à fluorescence induite par la lumière (LIF).
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