Composition et contenu du LNP

L'importance de l'analyse de la composition lipidique du LNP

Les nanoparticules lipidiques (LNP), comprenant des lipides cationiques, du cholestérol, des phospholipides et des lipides conjugués au PEG, servent de systèmes d'administration importants pour les produits médicamenteux à ARNm. La stabilité et la fluidité de la bicouche des LNP dépendent des propriétés et du contenu des différents lipides utilisés dans le système de formulation. La composition des lipides est très importante pour la façon dont les LNP délivrent les médicaments.

Yaohai-BioPharma fournit des solutions pour identifier et quantifier la composition lipidique de l'ARNm-LNP à l'aide de la méthode de chromatographie liquide haute performance avec détection d'aérosols chargés (HPLC-CAD).

Exigences réglementaires concernant la composition lipidique

Selon les considérations réglementaires de l’OMS, « la composition finale du vaccin, y compris les lipides, doit être décrite ainsi que la quantité de composants dans chaque présentation ».

Méthode analytique

Procédure

Étape 1. Préparation des échantillons lipidiques

Le choix du diluant est d’une importance primordiale pour l’analyse des composants lipidiques des produits médicamenteux ARNm-LNP. Le diluant doit dissoudre efficacement chaque composant lipidique et perturber toute interaction entre les lipides et l'ARNm encapsulé. Les diluants potentiels comprennent l'éthanol, l'éthanol/diméthylsulfoxyde (DMSO), l'éthanol/formamide, l'éthanol/acétate de triéthylamine et autres.

Étape 2. HPLC-CAO

La chromatographie liquide en phase inverse (RP-HPLC) associée à un détecteur d'aérosol chargé (CAD) a été intégrée aux tests de composition lipidique du LNP. Étant donné que les lipides manquent de chromophores et n’absorbent pas le rayonnement ultraviolet (UV) sans dérivatisation, la volatilisation est généralement difficile. La CAD, étant plus sensible, peut discerner un spectre plus large de teneur en lipides. Auparavant, une chromatographie liquide à ultra haute performance (UHPLC) couplée à une méthode de détection d'aérosols chargés (CAD) avait été formulée et appliquée à l'analyse des lipides pour les études LNP de petits ARN interférents (siRNA).

Étape 3. Analyse des données

La quantité de chaque lipide dans l'échantillon impliquait des calculs dérivés de la courbe standard multipliée par le facteur de dilution. Ce processus a donné la teneur en lipides pour chaque constituant de l’échantillon d’ARNm-LNP.

Cas de l'analyse de la composition lipidique du LNP avec HPLC-CAD

Basé sur HPLC-CAD, Yaohai-BioPharma a développé une méthode robuste pour l'analyse des composants lipidiques de l'ARNm-LNP. Cette méthode a été validée comme étant linéaire, reproductible, précise et spécifique pour les formulations de LNP, ce qui pourrait prendre en charge le développement de processus, le développement de formulations, les tests de stabilité et la libération d'ARNm-LNP.

Profil chromatographique de 4 lipides par méthode HPLC-CAD de Yaohai-BioPharma

La linéarité de la méthode HPLC-CAD de Yaohai-BioPharma (R2＞0.99)