Раскрыццё аптымальнай дазоўкі eGFP-рэпарцёрнай РНК

У малекулярнай біялогіі і біятэхналогіі ўзмоцнены зялёны флуарэсцэнтны бялок (eGFP) стаў ключавым генам-рэпарцёрам дзякуючы яго здольнасці вырабляць ярка-зялёную флуарэсцэнцыю пры 509 нм. Гэты бялок, першапачаткова вылучаны з медузы Aequorea victoria, з'яўляецца прамым маркерам выяўлення ў культурах клетак млекакормячых, палягчаючы маніторынг і аптымізацыю эфектыўнасці трансфекцыі. Аднак узнікае пытанне: якая аптымальная дазоўка рэпарцёрнай РНК eGFP для дасягнення жаданых узроўняў экспрэсіі?

Даследаванне паказала, што эфектыўнасць рэпарцёрнай РНК eGFP моцна залежыць ад яе дазоўкі, асабліва ў кантэксце сістэм кальцавой РНК (circRNA) і самаампліфікацыйнай мРНК (saRNA). Даследаванні, праведзеныя камандай Katrien Remaut з даследчай групы нанамедыцыны Універсітэта Гента, падкрэслілі складаную ўзаемасувязь паміж дазоўкай saRNA і яе эфектыўнасцю трансляцыі ў клетках сятчаткі. Яны выявілі, што нізкія дозы saRNA, ніжэйшыя за парог прыроджанай імуннай актывацыі, спрыяюць эфектыўнай экспрэсіі бялку. Гэта падкрэслівае важнасць дакладнага кантролю дазоўкі для выкарыстання поўнага патэнцыялу рэпарцёрнай РНК eGFP.

У практычных прымяненнях звычайна выкарыстоўваюцца канцэнтрацыі мРНК eGFP могуць вагацца ад мікраграмаў (мкг) да нанаграмаў на мікралітр (нг/мкл). Напрыклад, у эксперыментах па трансфекцыі было паказана, што дозы ў дыяпазоне ад 0.05 мкг да 0.5 мкг мРНК eGFP даюць значныя ўзроўні экспрэсіі ў розных тыпах клетак, у некаторых выпадках працэнт станоўчых клетак дасягае 99-100%. Характэрна, што пры дозах ніжэй за 0.1 мкг саРНК дэманструе лепшыя ўзроўні экспрэсіі ў параўнанні з лінейнай мРНК, дэманструючы сваю перавагу ў самаўзмацненні.

Універсальнасць рэпарцёрнай РНК eGFP заключаецца не толькі ў яе яркай і стабільнай флуарэсцэнцыі, але і ў яе адаптыўнасці да розных эксперыментальных установак. Даследчыкі могуць дакладна наладзіць дазоўку ў адпаведнасці са сваімі канкрэтнымі патрэбамі, забяспечваючы дакладны кантроль узроўняў экспрэсіі генаў. Гэтая функцыя робіць eGFP неацэнным інструментам для вывучэння функцыі генаў, маніторынгу лёсу клетак і аптымізацыі пратаколаў трансфекцыі.

У заключэнне варта сказаць, што аптымальная дазоўка рэпарцёрнай РНК eGFP моцна залежыць ад эксперыментальнага кантэксту і жаданых вынікаў. Уважліва падбіраючы адпаведную дозу, даследчыкі могуць выкарыстоўваць увесь патэнцыял гэтага універсальнага гена-рэпарцёра, пашыраючы наша разуменне малекулярных механізмаў і спрыяючы інавацыям у біятэхналогіі.

Yaohai Bio-Pharma - першы і найбуйнейшы біяпрэпарат, прысвечаны сістэме экспрэсіі мікробаў CRDMO ў Вялікім Кітаі. Мы імкнемся задаволіць клінічныя і камерцыйныя патрэбы нашых глабальных кліентаў у біялагічных леках, вакцынах і дыягностыцы для людзей і ветэрынарыі.

Мы таксама актыўна шукаем інстытуцыйных або індывідуальных глабальных партнёраў. Мы прапануем найбольш канкурэнтаздольную кампенсацыю ў галіны. Калі ў вас ёсць якія-небудзь пытанні, калі ласка, не саромейцеся звяртацца да нас: [email protected]