Тэхналогія вытвору eGFP mRNA

Nov 21, 2024

Выработка mRNA eGFP (Пасіленага Зялёна Флуарэсцэнтнага Прабелка) уключает серыю молекулярна-біялогічных тэхналогій для атрымання функцыянальнага RNA-малекулы, якая кодавае вырашэнне eGFP. У сферы mRNA eGFP Yaohai Bio-Pharma накапала шырока досвіду ў задаванні спецыфічных патрабванняў кліентаў. Выкарыстоўваючы наш дасвед, мы сконцентравалі працэсы для вытвору EGFP mRNA.

Клоніроўванне гена eGFP : Дастаць генную секвенцыю, якая кодавае eGFP. Гэтая гена звычайна клоніруецца з існуючага плазміднага вектара ці сінтэзіруецца штучна на аснове вядомай нуклеатыднай секвенцыі. Клонаваны ген потым верыфікуецца праз секвеняванне, каб пераконацца ў правільнасці.
Аптымізацыя гена для вырашэння : Для аптымалнага выразу ў цэлевай сістэме (напрыклад, у мамалыных клеткі, бактэрый ці сістэм транскрыпцыі in vitro) ген eGFP можа падвергнутся аптымізацыі кодонаў. Гэта ўключае замену рэдка ўжываных кодонаў у початковай последаватelnасці на часта ўжываныя ў хост-арганізме, збяльшваючы імавернасць эфектыўнай транслатацыі.
У клетцы Падготовка шаблона транскрыпцыі : Пасля таго як аптымізаваны ген будзе готовы, яго ўводząчы ў адпаведны вэктар, звычайна плазміду, якая ўключает рэгulaтарныя элементы, неабходныя для транскрыпцыі (напрыклад, проматарную послiдаватelnасць). Гэтая плазміда служыць шаблонам для транскрыпцыі in vitro.
У клетцы Транскрыпцыя : З дапамогай падгатавленага плазміднага шаблона выконваецца транскрыпцыя in vitro для сінтэзу mRNA eGFP. Гэты працэс уключае ўжыццё энзымоў RNA-полімераз, якія распаўняюць проматарную секвенцыю і ініцыяльваюць транскрыпцыю, вырабляючы камплементарны RNA-шынок да шаблоннага DNA. У залежнасці ад бажанага застасавання, mRNA можа быць капаная, поліадэнілаваная і/або модыфікавана для павелічэння стаялісці і эфектыўнасці трансляцыі.
Чысценне і кантроль якасці : Сінтэзаваная mRNA eGFP потым чысціцца ад любых забараў, уключвайучы DNA, белкі і свабодныя нуклеатыды. Метады чысценьня могу ўключаць гель-электрафарэз, столбчатую хроматографію ці раздзяленне на аснове бейкоў. Пасля чысценьня mRNA аналізуецца на якасць, уключвайучы канцэнтрацыю, чыстата і цэлкамыць, з выкарыстаннем тэхнік, таких як спектрафотаметрый УФ-видыма спектру і гель-электрафарэз.
Храненне і дастаўка : Чыстая mRNA eGFP звычайна храніцца ў нізкіх тэмпературах, каб утрымліваць стабільнасць. Для эксперыментальнага выкарыстання mRNA можна дастаўляць ў клеткі рознымі метадамі, уключна электрапарация, ліпофектыя ці вірусныя вэктары, залежна ад спецыфічнага прыменення і тыпу цэлевых клетак.
Экспрэсія і падтварэнне : Пасля пераводу ўнутры клеткі mRNA eGFP пераводзіцца ў палімер удзвігнутай зелёной флуорэсцэнтнай беліны, якую можна бачыць з дапамогай флуорэсцэнтнай мікраскопіі. Гэта дазваляе падтварыць паспяховыя працэсы працювання mRNA, яе дастаўлення і экспрэсію.

У супрацоў, працюванне mRNA eGFP уключае клонаванне гена, яго аптымізацыю для экспрэсіі, падготовку шаблона для транскрыпцыі in vitro, выпраўленне транскрыпцыі, чыстку атрыманай mRNA і, на кансцах, яе дастаўленне ў клеткі для экспрэсіі і падтварэння.

Мы таксама актыўна шукаем глобальныя партнёраў — інстытуцый ці індывідуальных. Мы прапановаем най konkurencyjaснейшую кампенсацыю ў промысле. Калі у вас ёсць якія-небудзь пытанні, калі ласка, не сціліцеся з нами звязацца: [email protected]