Працэс вытворчасці мРНК eGFP

Вытворчасць мРНК eGFP (палепшанага зялёнага флуарэсцэнтнага бялку) уключае шэраг метадаў малекулярнай біялогіі для стварэння функцыянальнай малекулы РНК, якая кадуе экспрэсію eGFP. У галіне мРНК eGFP Yaohai Bio-Pharma назапасіла вялікі вопыт задавальнення спецыфічных патрэб кліентаў. Выкарыстоўваючы наш вопыт, мы сінтэзавалі працэс атрымання мРНК EGFP.

1. Кланаванне гена eGFP: Гэта для атрымання паслядоўнасці гена, кадуючай для eGFP. Гэты ген звычайна клануюць з ужо існуючага плазміднага вектара або сінтэзуюць штучна на аснове вядомай паслядоўнасці нуклеатыдаў. Затым кланаваны ген правяраецца шляхам секвенирования для забеспячэння дакладнасці.
2. Аптымізацыя генаў для экспрэсіі: Для аптымальнай экспрэсіі ў сістэме-мішэні (напрыклад, клетках млекакормячых, бактэрыях або сістэмах транскрыпцыі in vitro) ген eGFP можа падвяргацца аптымізацыі кодона. Гэта ўключае ў сябе замену рэдкіх кадонаў у зыходнай паслядоўнасці на больш часта выкарыстоўваюцца ў арганізме гаспадара, павялічваючы шанцы эфектыўнай трансляцыі.
3. У прабірцы Падрыхтоўка шаблона транскрыпцыі: Пасля таго, як аптымізаваны ген гатовы, ён уключаецца ў прыдатны вектар, часта плазміду, якая змяшчае рэгулятарныя элементы, неабходныя для транскрыпцыі (напрыклад, паслядоўнасць промотора). Гэтая плазміда служыць шаблонам для транскрыпцыі in vitro.
4. У прабірцы транскрыпцыя: З дапамогай падрыхтаванай плазміднай матрицы праводзіцца транскрыпцыя in vitro для сінтэзу мРНК eGFP. Гэты працэс уключае выкарыстанне ферментаў РНК-палімеразы, якія распазнаюць паслядоўнасць промотора і ініцыююць транскрыпцыю, вырабляючы камплементарную ланцуг РНК да шаблону ДНК. У залежнасці ад жаданага прымянення, мРНК можа быць кепирована, полиаденилирована і/або мадыфікавана для павышэння стабільнасці і эфектыўнасці трансляцыі.
5. Ачыстка і кантроль якасці: Затым сінтэзаваная мРНК eGFP ачышчаецца для выдалення любых забруджванняў, уключаючы ДНК, вавёркі і свабодныя нуклеатыды. Метады ачысткі могуць ўключаць гель-электрафарэз, калонкавую храматаграфію або падзел на шарыках. Пасля ачысткі мРНК аналізуецца на якасць, уключаючы канцэнтрацыю, чысціню і цэласнасць, з выкарыстаннем такіх метадаў, як спектрафатаметрыя УФ-Вісу і гель-электрафарэз.
6. Захоўванне і дастаўка: Вычышчаная мРНК eGFP звычайна захоўваецца пры нізкіх тэмпературах для падтрымання стабільнасці. Для эксперыментальнага выкарыстання мРНК можа быць дастаўлена ў клеткі з дапамогай розных метадаў, уключаючы электрапарацыю, ліпафекцыю або вірусныя вектары, у залежнасці ад канкрэтнага прымянення і тыпу клеткі-мішэні.
7. Выраз і праверка: Апынуўшыся ўнутры клеткі, мРНК eGFP транслюецца ў узмоцнены зялёны флуарэсцэнтны бялок, які можна візуалізаваць з дапамогай флуарэсцэнтнай мікраскапіі. Гэта дазваляе праверыць паспяховую вытворчасць, дастаўку і экспрэсію мРНК.

Падводзячы вынік, вытворчасць мРНК eGFP ўключае кланаванне гена, яго аптымізацыю для экспрэсіі, падрыхтоўку шаблону транскрыпцыі in vitro, правядзенне рэакцыі транскрыпцыі, ачыстку атрыманай мРНК і, нарэшце, дастаўку яе ў клеткі для экспрэсіі і праверкі.

Мы таксама актыўна шукаем інстытуцыйных або індывідуальных глабальных партнёраў. Мы прапануем найбольш канкурэнтаздольную кампенсацыю ў галіны. Калі ў вас ёсць якія-небудзь пытанні, калі ласка, не саромейцеся звяртацца да нас: [email protected]